[發(fā)明專利]植物改造

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010512913.7
• 申請日: 2020-06-08
• 公開（公告）號: CN111979262A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 洪益國;張弦
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州師范大學
• 主分類號: C12N15/83
• 分類號: C12N15/83;C12N5/10;A01H5/00;A01H6/46;A01H6/20;C12N7/01;C07K14/005;C12R1/94
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

1.一種用于表達用于編輯植物中靶序列的完整基因組編輯GE系統(tǒng)的植物表達系統(tǒng)，其特征在于所述植物表達系統(tǒng)包括至少一個核苷酸序列，所述至少一個核苷酸序列包括：

(i)植物活性啟動子，所述植物活性啟動子有效連接至FoMV cDNA；

(ii)FoMV cDNA，所述FoMV cDNA編碼一個或多個重組狐尾草花葉病毒FoMV病毒載體，所述一種或多種重組狐尾草嵌紋病毒載體包括至少一個亞基因組啟動子SGP，所述至少一個亞基因組啟動子有效連接至編碼所述GE系統(tǒng)的異源核酸，以及終止子序列；

(iii)終止子序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物表達系統(tǒng)，其特征在于所述植物啟動子是花椰菜花葉病毒35S基因啟動子或重復的35S啟動子，和/或所述終止子序列是NOS終止子。

3.一種用于表達共同編碼用于編輯植物中靶序列的完整基因組編輯GE系統(tǒng)的一個或多個RNA轉(zhuǎn)錄本的體外表達系統(tǒng)，其特征在于所述表達系統(tǒng)包括至少一個核苷酸序列，所述至少一個核苷酸序列包括：

(i)啟動子，所述啟動子有效連接至FoMV cDNA；

(ii)FoMV cDNA，所述FoMV cDNA編碼一個或多個重組狐尾草花葉病毒FoMV病毒載體，所述一種或多種重組狐尾草嵌紋病毒載體包括至少一個亞基因組啟動子SGP，所述至少一個亞基因組啟動子有效連接至編碼所述GE系統(tǒng)的異源核酸。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的表達系統(tǒng)，其特征在于所述異源核酸還包括RNAi抑制子。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的表達系統(tǒng)，其特征在于所述RNAi抑制子是p19或其衍生物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的表達系統(tǒng)，其特征在于所述p19衍生物顯示在SEQ ID No：2中。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項所述的表達系統(tǒng)，其特征在于所述表達系統(tǒng)包括第一和第二表達載體，所述第一和第二表達載體分別編碼第一和第二FoMV病毒載體，所述第一和第二FoMV病毒載體共同編碼所述GE系統(tǒng)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的表達系統(tǒng)，其特征在于所述GE系統(tǒng)至少包括：

(a)Cas9；

(b)用于將所述GE系統(tǒng)靶向所述靶序列的小向?qū)NA，即sgRNA。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的表達系統(tǒng)，其特征在于所述Cas9包括FLAG和/或核定位信號。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的表達系統(tǒng)，其特征在于所述sgRNA有效連接至DNA依賴性RNA聚合酶III即Pol III啟動子序列，所述DNA依賴性RNA聚合酶III即Pol III啟動子序列是可選的U6啟動子核苷酸序列。

11.根據(jù)權(quán)利要求8至10中任一項所述的表達系統(tǒng)，其特征在于所述sgRNA包括與靶基因中的靶序列對應的靶序列，并包括原間隔物相鄰基序PAM。

12.根據(jù)權(quán)利要求7至11中任一項所述的表達系統(tǒng)，其特征在于所述表達系統(tǒng)包括第一和第二FoMV病毒載體，所述第一和第二FoMV病毒載體共同編碼所述GExit，且其中所述第一載體表達Cas9，所述第二載體表達所述sgRNA并可選地表達所述抑制子。

13.根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項所述的表達系統(tǒng)，其特征在于所述FoMV cDNA包括第一和第二FoMV SGP，其中：

所述第一SGP有效連接至編碼所述GE系統(tǒng)的所述異源核酸，并且

所述第二SGP亞基因組啟動子可操作性地連接至其天然的FoMV ORF。