[發明專利](R)-泛酸內酯乙酸酯的合成

在審

• 申請號: 202010511527.6
• 申請日: 2020-06-08
• 公開（公告）號: CN112048537A
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發明（設計）人: 米里婭·貝克勒-博格納;喬納森·艾倫·米德洛克;喬治·斯坦克爾納;格諾特·斯特羅邁爾;克爾斯廷·施泰納
• 申請（專利權）人: 帝斯曼知識產權資產管理有限公司
• 主分類號: C12P41/00
• 分類號: C12P41/00;C12P17/04;C12N1/19;C07D307/33;C12R1/84
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司 11258
• 代理人: 譚玲玲

1.一種生產(R)-泛酸內酯乙酸酯的方法，包括以下步驟：(1)使用具有羧酸酯水解酶[EC 3.1.1]活性的(R)-選擇性酶進行(R/S)-泛酸內酯和乙酸酯的對映選擇性醇解，所述酶優選包括三酰基甘油脂肪酶[EC 3.1.1.3]和角質酶[EC 3.1.1.74]，優選轉化率為至少約20％，以及(2)在作為(化學)催化劑的至少一種特定過渡金屬配合物存在下進行(S)-泛酸內酯的外消旋化。

2.根據權利要求1所述的方法，其中步驟(1)的所述酶選自由以下項組成的組：克氏擔孢酵母屬(Kurtzmanomyces sp.)，糠秕馬拉色菌(Malassezia furfur)，玉蜀黍黑粉菌(Ustilago maydis)，疏棉狀嗜熱絲孢菌(Thermomyces lanuginosus)(綿毛狀腐質菌(Humicola lanuginosa))，腐皮鐮孢菌(Fusarium solani)，特異腐質霉(Humicolainsolens)，南極假絲酵母(Candida antarctica)，和米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)，優選與SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5具有至少約80％，例如85％、90％、95％、98％或100％同一性的酶。

3.一種根據權利要求1或2中的步驟(1)催化外消旋泛酸內酯(pantolactone)和乙酸酯轉化成(R)-泛酸內酯乙酸酯的對映選擇性醇解酶，所述酶具有角質酶[EC 3.1.1.74]活性和至少約10的E值。

4.根據權利要求3所述的酶，所述酶在底物結合區中包含一個或多個氨基酸取代。

5.根據權利要求4所述的酶，所述一個或多個氨基酸取代位于與選自由根據SEQ IDNO:1的多肽中的28、66、169位及它們的組合組成的組的一個或多個殘基對應的一個或多個位置。

6.根據權利要求5所述的酶，其中所述一個或多個氨基酸取代選自與選自由根據SEQID NO:1的多肽中的28、66、169位及它們的組合組成的組的一個或多個殘基對應的T28L、T28A、L66A、V169A，及它們的組合。

7.一種宿主細胞，優選酵母，更優選畢赤酵母(Pichia)，其包含根據權利要求3至6中任一項所述的異源酶。

8.根據權利要求3至6中任一項所述的酶或根據權利要求7所述的宿主細胞在根據權利要求1或2的步驟(1)由外消旋泛酸內酯和乙酸酯生產(R)-泛酸內酯乙酸酯的方法中的用途，其中E值為至少約10。

9.根據權利要求1或2所述的方法，包括在作為催化劑的至少一種特定過渡金屬配合物的存在下進行(S)-泛酸內酯的外消旋化的步驟，優選地其中所述至少一種過渡金屬選自由Ru、Rh、Ir、Fe、Mn和Co組成的組，更優選選自Ru或Ir。

10.根據權利要求9所述的方法，其中所述方法在選自由脂族烴、芳族烴、氯化烴、酯、醚和醇組成的組的溶劑中進行，所述溶劑優選選自由甲基叔丁基醚、THF、2-甲基-THF、甲苯、二甲苯、環己烷和乙酸乙酯組成的組。

11.根據權利要求9或10所述的方法，其中所述方法在約25℃至100℃之間，優選在約40℃至90℃之間的溫度下進行。

12.根據權利要求9至11中任一項所述的方法，包括在Shvo催化劑的存在下進行(S)-泛酸內酯的外消旋化，所述Shvo催化劑為1-羥基四苯基-環戊二烯基(四苯基-2,4-環戊二烯-1-酮)-μ-氫四羰基二釕(II)。

13.根據權利要求1、2或9至12中任一項所述的方法，其中步驟(1)和步驟(2)二者在一鍋反應器中或在回路或級聯反應器中執行。