[發明專利]一種基于UPLC指紋圖譜和化學計量法的甘草產地判別方法

有效

• 申請號: 202010499895.3
• 申請日: 2020-06-04
• 公開（公告）號: CN113759003B
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 張堂;祝宇龍;張靜;吳夢飛;彭燦;彭代銀
• 申請（專利權）人: 合肥衛元堂中藥股份有限公司;安徽中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/54;G01N30/86;G01N30/88;G01N30/72
• 代理公司: 廣州致信偉盛知識產權代理有限公司 44253
• 代理人: 彭玲

1.一種基于UPLC指紋圖譜和化學計量法的甘草產地判別方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）收集各產地的甘草藥材，采用超高效液相色譜法建立甘草不同產地、不同提取物的指紋圖譜；所述甘草藥材采自新疆、甘肅和內蒙古；所述提取物為甘草醇提物和甘草水提物；

（2）利用相似性分析SA、層次聚類分析HCA、主成分分析PCA和正交偏最小二乘判別分析法OPLS-DA篩選特征標記化合物；

（3）采用超高效液相色譜-四極桿飛行時間質譜對特征標記化合物進行鑒定，并采用超高效液相色譜法進行定量分析；

（4）采用Wilk's lambda法進行逐步判別分析，得到甘草不同產地、不同提取物的判別函數方程，對甘草藥材產地進行判別；

甘草不同產地醇提物的判別函數方程為：

Y新疆=7.629S₁+3.029S₂-0.404S₃+663.007S₄+1765.007S₅+0.537S₆-82.594；

Y甘肅=8.026S₁+3.36S₂-1.452S₃+830.744S₄+1857.135S₅+0.619S₆-95.093；

Y內蒙古=7.646S₁+3.706S₂-0.489S₃+649.922S₄+1793.914S₅+0.599S₆-94.193；

其中，S₁為芹糖甘草苷，S₂為甘草苷，S₃為芹糖異甘草苷，S₄為甘草素，S₅為刺甘草查爾酮，S₆為甘草酸；

甘草不同產地水提物的判別函數方程為：

Y新疆=3.783S₁+2.731S₂-0.137S₃+2418.876S₄-131.472S₅+0.697S₆-44.812；

Y甘肅=3.698S₁+3.163S₂-1.26S₃+3107.573S₄-327.356S₅+0.792S₆-49.803 ；

Y內蒙古=3.423S₁+3.539S₂-1.159S₃+3713.539S₄-500.921S₅+0.957S₆-58.480 ；

其中，S₁為芹糖甘草苷，S₂為甘草苷，S₃為芹糖異甘草苷，S₄為刺甘草查爾酮，S₅為甘草查爾酮B，S₆為甘草酸；

步驟（1）和步驟（3）中，所述超高效液相色譜法中的色譜條件為：

Waters-CORTECS C18 柱，規格為4.6×50mm，2.7μm；檢測波長254nm；以乙腈為流動相A和0.1%甲酸水溶液為流動相B，梯度洗脫，梯度洗脫程序為：0–2 min，80–75%B；2–4 min，75–73%B；4–12 min，73–60%B；12–18 min，60–40%B；18–20 min，40–80%B；20–25min，80%B；柱溫30℃；流速為0.3ml/min，進樣量為1μL。

2.根據權利要求1所述的一種基于UPLC指紋圖譜和化學計量法的甘草產地判別方法，其特征在于，步驟（1）中，所述甘草醇提物的制備方法為：

精密稱取甘草藥材粉末，精密加入30-50倍量的60-80%乙醇，稱定質量，超聲提取20-40min，放冷后再次稱定質量，加入60-80%乙醇補足失重，搖勻靜置，經0.22 μm的有機系濾膜過濾后，取續濾液即得。