[發明專利]一種適用于BioNano技術DNA材料要求的香蕉組織培養方法

有效

• 申請號: 202010499472.1
• 申請日: 2020-06-04
• 公開（公告）號: CN111543324B
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 劉立娜;楊寶明;鄭泗軍;黃玉玲;李永平;曾莉;李迅東;番華彩;尹可鎖;白亭亭;徐勝濤;李舒
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院農業環境資源研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明普發諾拉知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 53209
• 代理人: 方金敏

1.一種適用于BioNano技術DNA材料要求的香蕉組織培養方法，包括以下步驟：

(1)外植體選擇：

晴天時，選擇健壯、長勢良好、無病害、無蟲害的植株吸芽；

(2)外植體滅菌：

將步驟(1)中吸芽在自來水下沖洗干凈，剝除外層老葉、葉鞘和部分苗生長點，在無菌工作臺內用0.1％HgCl₂溶液浸泡30分鐘，然后用無菌水沖洗3-4次，用無菌濾紙吸干表面水分；

(3)外植體誘導：

將步驟(2)中滅菌的外植體從中部剖開，將含有生長點的外植體縱向一分為二，然后接種到誘導培養基中，在培養溫度26～30℃，光照強度1600～2000lx，光照時間12小時/天的條件下培養40～50天，外植體基部產生不定芽叢，所述誘導培養基為：MS培養液+6-BA4 mg/L+NAA0.2 mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂5-10g/L，pH 5.8～6.0；

(4)增殖培養：

將步驟(3)經外植體誘導產生的不定芽叢，選擇高度2-3cm的切割成含2-3個芽的小塊，接種到固體增殖繼代培養基中，在培養溫度26～30℃，光照強度1600～2000lx，光照時間12小時/天的條件下培養30～40天，得到高度為3-5cm的小苗，所述固體增殖繼代培養基為：MS培養液+NAA0.15 mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂5-10g/L，pH 5.8～6.0；

(5)生根培養：

將步驟(4)培養得到3-5cm高度的小苗切割，接種到帶有生根培養基的組培瓶中，脫脂棉固定切割的香蕉小苗，在搖床溫度26～30℃，搖床速度50-70次/分鐘的條件下，光照強度1600～2000lx，光照時間8小時/天的條件下培養10-20天，獲得生根苗用于BioNano技術的DNA提取，所述生根培養基為：MS培養液+NAA0.5 mg/L+蔗糖10-15g/L，pH 5.6～5.8；

所述的MS培養液的基本成分為NH₄NO₃190 mg/L，KNO₃165 mg/L，KH₂PO₃17 mg/L，MgSO₄37mg/L，CaCl₂44 mg/L，MnSO₄22.3μg/L，ZnSO₄8.6μg/L，NaMoO₄0.25μg/L，CuSO₄0.025μg/L，CoCl₂0.025μg/L，KI 0.83μg/L，H₃BO₃6.2μg/L，VB₁0.5-2.5μg/L，VB₆2.5μg/L，VB₃2.5μg/L，氨荃乙酸10μg/L，肌醇0.5mg/L，乙二胺四乙酸二鈉37.25mg/L，硫酸亞鐵27.85mg/L。