[發(fā)明專利]一種丁酸梭菌的快速篩選方法

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• 申請日: 2020-06-02
• 公開（公告）號: CN111471740A
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發(fā)明（設計）人: 婁百勇;呂向云;劉娟;李冰;韓鵬軍;楊永;曹華偉;遠萬里
• 申請（專利權）人: 駐馬店華中正大有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/145
• 代理公司: 北京勁創(chuàng)知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11589
• 代理人: 張鐵蘭

1.一種篩選丁酸梭菌的平板分離初篩培養(yǎng)基，其特征在于，包括以下質(zhì)量百分含量的組分：蛋白胨8％-12％、酵母浸粉8％-12％、葡萄糖0.5％-1％、NaCl 2％-7％、溴甲酚綠0.5％-0.7％、瓊脂1.3％-1.6％和余量的水。

2.一種篩選丁酸梭菌的平板分離初篩方法，其特征在于，包括以下步驟：

將活化后的丁酸梭菌菌株種子液涂布于權利要求1所述的平板分離初篩培養(yǎng)基中，于35℃-37℃厭氧培養(yǎng)24-48h，測量平板分離初篩培養(yǎng)基上單菌落產(chǎn)生的變色圈直徑，變色圈直徑≥0.5cm的單菌落即為初篩合格的丁酸梭菌。

3.一種丁酸梭菌的快速篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將權利要求2中初篩合格的丁酸梭菌進行孔板復篩得到丁酸梭菌的種子液，檢測所得種子液的丁酸含量；

(2)選取步驟(1)中丁酸含量較原始初篩合格的丁酸梭菌提升≥5％的菌株作為復篩優(yōu)株進行試管斜面培養(yǎng)和搖瓶培養(yǎng)，檢測搖瓶培養(yǎng)后所得種子液的丁酸含量；搖瓶培養(yǎng)后所得種子液中較復篩優(yōu)株丁酸含量提升≥5％的菌株即為篩選得到的丁酸梭菌。

4.根據(jù)權利要求3所述的篩選方法，其特征在于，所述孔板復篩包括96孔板厭氧培養(yǎng)和48孔板厭氧培養(yǎng)；所述96孔板厭氧培養(yǎng)時間為12-17h；所述48孔板厭氧培養(yǎng)時間為24-48h。

5.根據(jù)權利要求3所述的篩選方法，其特征在于，所述試管斜面培養(yǎng)為厭氧培養(yǎng)；所述厭氧培養(yǎng)的溫度為35℃-37℃，所述厭氧培養(yǎng)的時間為24-48h。

6.根據(jù)權利要求5所述的篩選方法，其特征在于，所述試管斜面培養(yǎng)的培養(yǎng)基，以水為溶劑，包括以下組分：蛋白胨8-12g/L、酵母浸粉8-12g/L、葡萄糖0.5-1g/L、NaCl 2-7g/L、瓊脂1.3-1.6g/L。

7.根據(jù)權利要求3所述的篩選方法，其特征在于，所述搖瓶培養(yǎng)包括搖瓶液體種子培養(yǎng)和搖瓶液體發(fā)酵培養(yǎng)。

8.根據(jù)權利要求7所述的篩選方法，其特征在于，所述搖瓶培養(yǎng)的溫度為35℃-37℃。

9.根據(jù)權利要求7所述的篩選方法，其特征在于，所述搖瓶液體種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基，以水為溶劑，包括以下組分：蛋白胨8-12g/L、酵母浸粉8-12g/L、葡萄糖5-8g/L、NaCl 2-7g/L；所述搖瓶液體發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基，以水為溶劑，包括以下組分：蛋白胨8-12g/L、酵母浸粉8-12g/L、葡萄糖10-12g/L、NaCl 2-7g/L。

10.根據(jù)權利要求7所述的篩選方法，其特征在于，所述搖瓶液體種子培養(yǎng)的時間為12-17h；所述搖瓶液體發(fā)酵培養(yǎng)的時間為24-48h。