[發(fā)明專利]小麥TaRDR6基因及其在雄性不育中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010483740.0
• 申請日: 2020-06-01
• 公開（公告）號: CN111534522B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張榮志;李根英;李玉蓮;宋國琦;張淑娟;李瑋;李吉虎;高潔;谷田田
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;C12N15/65;C12N15/113;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 濟(jì)南誠智商標(biāo)專利事務(wù)所有限公司 37105
• 代理人: 房一粟

1.一種利用小麥TaRDR6基因構(gòu)建雄性不育的小麥植株的方法，其特征在于，降低或沉默小麥中小麥TaRDR6基因的表達(dá)；所述小麥TaRDR6基因位于第三號染色體的3B和3D上，分別命名為TaRDR6-3B和TaRDR6-3D，所述TaRDR6-3B的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述TaRDR6-3D的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述降低或沉默小麥中小麥TaRDR6基因的表達(dá)，具體包括如下步驟：

1）設(shè)計靶向TaRDR6基因的sgRNA；所述的TaRDR6基因的sgRNA的核苷酸序列SEQ IDNO.3所示；

2）根據(jù)步驟1）獲得的sgRNA設(shè)計sgRNA的擴(kuò)增引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物；

3）利用步驟2）獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物和pBUE411載體構(gòu)建具有敲除小麥TaRDR6基因功能的pBUE411-RDR6雙元載體；

所述的具有敲除小麥TaRDR6基因功能的pBUE411-RDR6雙元載體，包括表達(dá)盒A和表達(dá)盒B；

所述表達(dá)盒A自上游至下游具體依次包括如下元件：來自小麥的TaU3啟動子A、所述TaRDR6基因的sgRNA和終止子A；所述啟動子A的序列如SEQ ID NO.5所示；所述終止子A序列如SEQ ID NO.7所示；

所述表達(dá)盒B自上游至下游依次具體包括如下元件：啟動子B、玉米Cas9編碼序列和終止子B；所述啟動子B序列如SEQ ID NO.6所示；所述玉米Cas9編碼序列如SEQ ID NO.4所示；所述終止子B序列如SEQ ID NO.8所示；

4）利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)將步驟3）獲得的雙元載體轉(zhuǎn)化入植物中，降低或沉默小麥TaRDR6基因的表達(dá)，即可獲得花粉敗育的小麥植株。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述表達(dá)盒A位于所述表達(dá)盒B的上游，表達(dá)盒A和表達(dá)盒B相互串聯(lián)。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述pBUE411-RDR6雙元載體還含有抗性標(biāo)記基因；所述pBUE411- RDR6雙元載體的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2）中所述的sgRNA的擴(kuò)增引物為RDR6-gR1-TaU3-F和RDR6-gR1-TaU3-R，RDR6-gR1-TaU3-F序列如SEQ ID NO.10所示，RDR6-gR1-TaU3-R序列如SEQ ID NO.11所示。