[發(fā)明專利]超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測血清中抗抑郁藥物濃度的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010483276.5
• 申請日: 2020-06-01
• 公開（公告）號: CN111812222A
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 成曉亮;李美娟
• 申請（專利權(quán)）人: 南京品生醫(yī)學(xué)檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 南京思拓知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32288
• 代理人: 呂鵬濤

本發(fā)明公開了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測血清中抗抑郁藥物濃度的方法，這些藥物分別為：安非他酮、阿戈美拉汀、羥安非他酮、去甲替林、o?去甲文拉法辛、米安色林、米氮平、文拉法辛、阿米替林、多慮平、去甲氟西汀、度洛西汀、氟西汀、氟伏沙明、西酞普蘭、帕羅西汀、曲唑酮和伏硫西汀。血清樣本經(jīng)預(yù)處理后，先利用超高效液相色譜將待測物與血清基質(zhì)進行分離，再利用質(zhì)譜同位素內(nèi)標(biāo)定量法，以標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)物的濃度比為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比為Y軸，建立校準(zhǔn)曲線，計算血清中藥物的含量。本發(fā)明方法靈敏度高、特異性強、準(zhǔn)確且前處理過程較簡單，4.5min之內(nèi)可完成分離和檢測，準(zhǔn)確度和精密度基本滿足要求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于血液檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測血清中抗抑郁藥物濃度的方法。

背景技術(shù)

目前抑郁癥常用的治療藥物根據(jù)其作用機制分為：去甲腎上腺素再攝取抑制劑、5-羥色胺(5-HT)再攝取抑制劑(SSRI)、5-HT和去甲腎上腺素再攝取抑制劑(SNRI)、去甲腎上腺素和特異性的5-HT能抗抑郁藥(NaSSA)、5-HT2受體拮抗藥和5-HT再攝取抑制劑、去甲腎上腺素和多巴胺再攝取抑制劑和褪黑素受體激動藥。

國內(nèi)外文獻(xiàn)報道中測定人血清或血漿中抗抑郁藥的方法主要有HPLC-UV法、GC-MS法和LC-MS/MS法，比如文獻(xiàn)“Quantification of 33antidepressants by LC-MS/MS—comparative validation in whole blood,plasma and serum”報道一種液液萃取檢測33種抗抑郁藥方法，但是前處理需要液液萃取，氮吹濃縮等復(fù)雜程序，每個樣本采集需要30分鐘。比如，中國專利(CN108982714A)公開了“一種簡便高效檢測人血漿中文拉法辛及其活性代謝物o-去甲文拉法辛濃度的方法”，該發(fā)明是將500μL血漿樣本加入乙醚進行液液萃取，然后氮吹后復(fù)溶進樣，再通過高效液相熒光法檢測待測物濃度；此發(fā)明前處理費時費力，樣本用量大，而且單個樣本的分析時間較長。另，中國專利(CN 109655568A)公開了一種“高效液質(zhì)聯(lián)用同時測定35種精神藥物的方法及試劑盒”，該發(fā)明雖前處理簡單，但使用外標(biāo)法定量，準(zhǔn)確性差。再比如，西北藥學(xué)雜志2019年11月第34卷第6期題為“LC-MS/MS法同時測定人血漿中氟西汀、去甲氟西汀、帕羅西汀和氟伏沙明的質(zhì)量濃度”，該發(fā)明使用200μL血漿進行蛋白沉淀，樣本用量大；使用羅紅霉素作為所有待測物的內(nèi)標(biāo)，缺乏普遍適用性和準(zhǔn)確性，可能會存在基質(zhì)效應(yīng)干擾；4種藥物的線性范圍均相同，未經(jīng)臨床驗證，缺乏合理性。此外，因為臨床樣本極其珍貴，因此前處理樣本量盡量要少，且進樣量大會嚴(yán)重污染儀器，增加儀器維護成本。本發(fā)明采用單一方法評估不同抗抑郁藥將會大大簡化和方便實驗室監(jiān)測，滿足臨床的需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測血清中抗抑郁藥物濃度的方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測血清中抗抑郁藥物濃度的方法，

血清樣本通過預(yù)處理取上清進樣，先利用超高效液相色譜將抗抑郁藥物濃度與血清基質(zhì)分離，再利用質(zhì)譜同位素內(nèi)標(biāo)定量法，以標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)物的濃度比為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比為Y軸，建立校準(zhǔn)曲線，計算抗抑郁藥物的含量。具體色譜條件為：

(1)高效液相色譜條件：

流動相A：水(含0.01％甲酸)；

流動相B：甲醇(含0.01％甲酸)；

色譜柱：Phenomenex Kintex C18(2.1×100mm，2.6μm)；

采用流動相A和流動相B為混合流動相進行梯度洗脫，見表1；所述梯度洗脫過程如下：