[發明專利]一種利用固氮酶nif基因鑒定滿江紅葉腔中共生固氮藍藻的方法

在審

• 申請號: 202010482079.1
• 申請日: 2020-06-01
• 公開（公告）號: CN111500755A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 陳堅;鄭偉文;陳彬;鄭斯平;鄭益平
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6869;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

1.一種利用固氮酶nif基因鑒定滿江紅葉腔中共生固氮藍藻的引物，其特征在于：所述引物為：nifH-F：5'-AAAGGYGGWATCGGYAARTCCACCAC-3'；nifH-R：5'-TTGTTSGCSGCRTACATSGCCATCAT-3'。

2.一種利用固氮酶nif基因鑒定滿江紅葉腔中共生固氮藍藻的方法，其特征在于：所述方法包括如下：

（1）對滿江紅樣本表面消毒除菌處理；

（2）滿江紅DNA提取與PCR擴增

用植物基因組提取試劑盒分離提取樣本的DNA，以提取的滿江紅基因組DNA為模板，以nifH基因序列作為擴增的目標區域片段，引物序列為nifH-F：5'-AAAGGYGGWATCGGYAARTCCACCAC-3'；nifH-R：5'-TTGTTSGCSGCRTACATSGC CATCAT-3'；反應體系20μl：4 μl 的5×FastPfu Buffer；2 μl 的2.5 mM dNTPs；各0.8 μl的5 μM ForwardPrimer及nifH基因Reverse Primer；0.4 μl TransStart FastPfu Polymerase；0.2 μlBSA；10 ng Template DNA；補ddH₂O至20 μl；PCR反應參數：1× (3 minutes at 95℃)；35循環× (30 seconds at 95℃；30 seconds at；45 seconds at 72℃) ，循環退火溫度55℃；10 minutes at 72℃；PCR產物經1％瓊脂糖凝膠電泳檢測后，對nif基因的擴增序列進行高通量測序；

（3）數據處理與生物信息學分析。