[發明專利]一種用于體外擴增暨活化γδ-T細胞的培養基

在審

• 申請號: 202010475488.9
• 申請日: 2020-05-29
• 公開（公告）號: CN112300990A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 張順浪;林杰良;楊智雅;孫境新;劉威廷;唐曉艷
• 申請（專利權）人: 基亞細胞科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

本發明關于一種體外擴增暨活化γδ?T細胞的培養基，該培養基包含自體樹突細胞外泌體，可有效率地提升細胞擴增倍數，并產生對癌細胞具有高度毒殺活性的γδ?T細胞。

技術領域

本發明關于一種體外擴增暨活化γδ-T細胞的培養基。

背景技術

免疫細胞治療是將病人本身的免疫細胞在體外增殖和活化后，再回輸至體內的一種治療方式。目前免疫細胞治療已逐漸被應用于癌癥治療上，成功的關鍵在于了解各類免疫細胞的特性和功能，并根據癌癥患者的狀況及基因特性來選擇最合適的免疫細胞類型，例如NK細胞、T細胞等。

人體免疫系統中的T細胞大致上分為二大類:Alpha-Beta T細胞與Gamma-Delta T(γδ-T)細胞。γδ-T細胞存在于外圍血液中，其數量只占外圍血液中所有T細胞的1％～5％。它是藉由辨識細胞表面的異戊烯基焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)分子來區分正常與異常細胞。IPP是細胞代謝的一個中間產物，它在癌細胞內的產量會增加，尤其是當癌細胞的p53基因突變時。識別IPP的γδ-T細胞會增殖和活化并會增強攻擊腫瘤細胞的力量，此為γδ-T細胞的特殊功能，如果其他免疫細胞沒有偵測到癌細胞標志的話，γδ-T細胞還是可以發現癌細胞，并加以攻擊。以一般情況來說，異常的細胞會擁有和其他正常細胞不同的分子，γδ-T細胞將這些作為癌細胞標志來識別并進行攻擊。除了IPP分子之外，γδ-T細胞也能透過MIC A/b、HMB-PP、細胞間粘附分子-1，CD166等標記物來進行辨識。因此，γδ-T細胞能辨識與殺死多種癌細胞。

γδ-T細胞有一個很重要的特征，即在辨識異常細胞時不需要HLA，因此與個體的HLA型別無關。這個特征使得γδ-T細胞可使用在任何人身上而不會產生移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)。目前在美國、歐洲與日本已有許多細胞療法的人體臨床應用是使用γδ-T細胞來進行的，這些臨床應用皆證實γδ-T細胞的使用是安全無虞的。

由于γδ-T細胞在血液中數量稀少且其增生能力因人而異，因此以γδ-T細胞進行細胞療法的挑戰在于是否能夠于體外大量且快速的擴增并活化γδ-T細胞。近幾年發現，使用唑來膦酸(Zoledronic acid)能使γδ-T細胞大量增殖，其技術也已經確立。唑來膦酸除了使用在培養γδ-T細胞之外，將唑來膦酸注射到癌癥患者體內可以發現癌細胞更大量表現IPP，藉此可以提高γδ-T細胞對癌細胞的靈敏度。然而，唑來膦酸是一種治療骨質疏松癥的藥物，用于培養細胞或注射至病患體內仍存在一定疑慮，因此仍極需要開發出一種方便、有效、安全的體外擴增暨活化γδ-T細胞的培養基。

發明內容

本發明提供一種用于體外擴增暨活化γδ-T細胞的培養基，其包含濃度范圍介于5μg/ml至50μg/ml的自體樹突細胞外泌體。于一較佳實施例中，該自體樹突細胞外泌體的濃度為25μg/ml。

于一具體實施例中，該培養基另包含白介素-2；于一較佳實施例中，該白介素-2的濃度介于500IU/ml～2000IU/ml；于一更佳實施例中，該白介素-2的濃度為1000IU/ml。

于一具體實施例中，該培養基另包含唑來膦酸；于一較佳實施例中，該唑來膦酸的濃度介于1μM～20μM；于一更佳實施例中，該唑來膦酸的濃度為5μM。

于一具體實施例中，該培養基另包含自體血漿、人源AB血清或胎牛血清；于一較佳實施例中，該自體血漿、人源AB血清或胎牛血清約占總培養體積的10％。

于一具體實施例中，該培養基另包含一基礎培養基；于一較佳實施例中，該基礎培養基選自由AIM V、X-VIV015、CellGro SCGM、KBM 501、DMEM及RPM1-1640培養基所組成的群。