[發明專利]定量檢測體液中腫瘤來源細胞外囊泡PD-L1含量的方法、ELISA試劑盒及使用方法

在審

• 申請號: 202010475012.5
• 申請日: 2020-05-29
• 公開（公告）號: CN111551732A
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發明（設計）人: 陳剛;余自力;劉金元;吳敏;趙怡芳
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/574;G01N33/543
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 石超群

本發明涉及分子生物學和生物技術領域，具體涉及一種定量檢測體液中腫瘤來源細胞外囊泡PD?L1含量的方法、ELISA試劑盒及使用方法，利用抗EGFR抗體特異性捕獲腫瘤來源的細胞外囊泡，利用抗PD?L1抗體檢測細胞外囊泡中PD?L1蛋白的含量，利用構建的EGFR?PD?L1融合蛋白作為標準品實現對腫瘤來源細胞外囊泡中PD?L1的定量檢測。現有的ELISA檢測策略只能檢測體液中總PD?L1水平或者總細胞外囊泡上PD?L1水平，本發明利用“雙抗夾心”ELISA策略，實現了特異性和定量檢測體液中腫瘤來源細胞外囊泡所攜帶的PD?L1的含量，具有明顯的優勢。

技術領域

本發明涉及分子生物學和生物技術領域，具體涉及一種定量檢測體液中腫瘤來源細胞外囊泡PD-L1含量的方法、ELISA試劑盒及使用方法。

背景技術

最新的數據顯示，全球每年新增惡性腫瘤患者1810萬人，死亡960萬人，惡性腫瘤已經是嚴重威脅人類健康和生命的疾病。大多數惡性腫瘤患者在確診時已處于晚期，失去了手術機會，且對放化療等保守治療方式不敏感，因此預后普遍較差。然而，近幾年來免疫治療的興起為晚期惡性腫瘤患者帶來了希望，其中針對免疫檢查點程序性凋亡配體-1/程序性死亡受體-1(PD-L1/PD-1)通路的抑制劑是目前腫瘤免疫治療的代表性藥物。盡管PD-L1/PD-1免疫治療療效顯著，甚至可以完全消除腫瘤達到治愈效果，但PD-L1/PD-1免疫治療并非對每一個患者都有效。臨床試驗結果表明，僅有不到30％的患者能夠從PD-L1/PD-1免疫治療中獲益。加之不僅治療費用高，且治療周期長，若治療無效，患者將喪失及時接受其他治療的時機。更重要的是，免疫治療引起的不良反應也不容忽視。因此尋找能夠在治療早期預測免疫治療療效的生物標志物是當務之急。

細胞外囊泡(Extracellular vesicles，EVs)是由細胞分泌產生的一類直徑介于50-1000nm的雙層磷脂分子組成的膜結構的統稱，其攜帶豐富的生物活性分子(如蛋白質、核酸等)，并可通過自分泌或旁分泌途徑參與對局部或遠處細胞的功能調控，影響細胞外微環境。發明人前期發表于Nature(Exosomal PD-L1contributes to immunosuppressionand is associated with anti-PD-1response,Gang Chen等，Nature,2018年560卷7718期382-386頁)的一項研究顯示，腫瘤細胞分泌富含PD-L1的細胞外囊泡進入機體外周循環系統參與免疫抑制；更重要的是，發明人還發現腫瘤患者外周血中的腫瘤細胞來源的細胞外囊泡攜帶的PD-L1水平，在腫瘤進展以及免疫治療的不同階段，呈現有規律的動態變化。因此，定量檢測腫瘤患者體液(尤其是外周血)中腫瘤細胞外囊泡攜帶的PD-L1水平，將有望成為預測惡性腫瘤進展、預后以及免疫治療療效的液體活檢的新標志物。