[發明專利]特異性檢測TWI型傳染性支氣管炎病毒的反轉錄-實時熒光定量PCR試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202010474807.4
• 申請日: 2020-05-29
• 公開（公告）號: CN111534642A
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發明（設計）人: 張小榮;廖凱;吳艷濤;郭夢嬌;陳淑琴;張成成;鄢坤;楚電峰;范根成;杜元釗
• 申請（專利權）人: 揚州大學;青島易邦生物工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

本發明公開了一種特異性檢測TW I型傳染性支氣管炎病毒的反轉錄?實時熒光定量PCR試劑盒及其應用。所述的試劑盒中至少含有兩套引物和探針之一，其中第一套檢測引物如SEQ ID NO.8－9所示，探針序列如SEQ ID NO.10所示，所述熒光探針5和3’端分別標記6?FAM基團和MGB基團；第二套檢測引物如SEQ ID NO.11－12所示，探針序列如SEQ ID NO.13所示，所述熒光探針5和3’端分別標記6?FAM基團和MGB基團。本發明的試劑盒敏感性高，特異性好，重復性好，能特異性檢測TW I型IBV，對于TW I型IBV臨床病例快速鑒別診斷和流行病學監測具有重要意義。

技術領域

本發明涉及一種反轉錄實時熒光定量PCR(RT-qPCR)試劑盒及其應用，特別涉及一種特異性檢測TW I型傳染性支氣管炎病毒(IBV)的RT-qPCR試劑盒及其應用。本發明屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

雞傳染性支氣管炎((Infectious bronchitis，IB))是雞的一種重要病毒性傳染病，病原為雞傳染性支氣管炎病毒((Infectious bronchitis virus，IBV))。IBV屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬中的γ冠狀病毒，其基因組為不分節段的單股正鏈RNA。大量研究表明，IBV易發生基因突變，導致IBV不時出現新的基因型并引起不同毒株之間存在較大的抗原差異，使病毒檢測和免疫預防日益復雜化。為有效控制本病的流行，加強病毒感染的監測，科研人員開發建立了大量的血清學、分子生物學等檢測方法，但這些方法普遍存在無法區分不同血清型IBV感染的不足，達不到鑒別診斷的要求，尤其是針對新出現的一些血清型的毒株，更是缺乏有效鑒別診斷的方法。實時熒光定量PCR技術具有靈敏度高、特異性強、反應速度快、重復性好的優點，通過設計型特異性引物和探針，可以快速、準確地區分不同血清型病毒的感染，達到鑒別診斷的目的。

TW I型IBV也被歸為GI-7型(Valastro V,et al.S1 gene-based phylogeny ofinfectious bronchitis virus:An attempt to harmonize virusclassification.Infect Genet Evol,2016,39:349-364.)，自2009年該型病毒首次被報道傳入中國大陸地區以來，該型病毒在我國的流行范圍迅速擴大。根據國內多個研究團隊對臨床發病雞群IBV流行病學監測結果顯示TW I型IBV分離率目前已經位居第二，說明該型病毒感染所產生的危害日趨嚴重，應當引起足夠重視。因此，本發明旨在提供一種定量檢測TWI型IBV的RT-qPCR試劑盒，為監測可能出現的TW I型IBV的流行提供技術支持。

發明內容

本發明的目的在于提供一種可特異性檢測TW I型IBV的RT-qPCR試劑盒。

本發明的難點在于選擇的引物和探針結合位點既要在不同基因型IBV毒株間具有較大的差異，以達到特異性區分不同基因型毒株的目的，而且相應序列的堿基組成、Tm值等條件還必須同時滿足qPCR引物和探針設計的要求。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：