[發明專利]檢測TC07-2型雞傳染性支氣管炎病毒的反轉錄-實時熒光定量PCR試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202010467131.6
• 申請日: 2020-05-28
• 公開（公告）號: CN111471801A
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發明（設計）人: 吳艷濤;陳淑琴;張小榮;張成成;郭夢嬌;廖凱;鄢坤
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

本發明公開了一種定量檢測TC07?2型雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的反轉錄?實時熒光定量PCR(RT?qPCR)試劑盒及其應用。該試劑盒包括用于檢測TC07?2型IBV的引物和探針，其中上游引物序列如SEQ ID NO.8所示，下游引物序列如SEQ ID NO.9所示，熒光探針序列如SEQ ID NO.10所示，所述熒光探針5和3’端分別標記6?FAM基團和MGB基團。本發明定量準確，檢測速度快，特異性強，靈敏度高，可鑒別檢測TC07?2型與其他基因型的IBV毒株，對TC07?2型IBV的感染監測具有重要意義。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，本發明涉及一種檢測TC07-2型雞傳染性支氣管炎病毒的反轉錄-實時熒光定量PCR(RT-qPCR)試劑盒及其應用。

背景技術

雞傳染性支氣管炎(Infectious bronchitis,IB)是一種由傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的急性、高度接觸性傳染病。該病毒在世界范圍內廣泛分布，主要侵害雞的呼吸系統、消化系統及泌尿生殖系統，幼雞以呼吸困難、咳嗽等呼吸道癥狀為主；產蛋雞通常發生產蛋量下降、蛋品質降低，嚴重時可引起雛母雞輸卵管發育不良；肉雞則出現生長緩慢，飼料報酬降低。自20世紀30年代首次報道以來，該病在世界范圍內廣泛流行，給各國養禽業帶來嚴重的經濟損失。

IBV屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬中的γ冠狀病毒，其基因組為不分節段的單股正鏈RNA。大量研究表明，IBV易發生基因突變，導致IBV不時出現新的基因型并引起不同毒株之間存在較大的抗原差異，使病毒檢測和免疫預防日益復雜化。為有效控制本病的流行，加強病毒感染的監測，科研人員開發建立了大量的血清學、分子生物學等檢測方法，但這些方法普遍存在無法區分不同血清型IBV感染的不足，達不到鑒別診斷的要求，尤其是針對新出現的一些血清型的毒株，更是缺乏有效鑒別診斷的方法。實時熒光定量PCR技術具有靈敏度高、特異性強、反應速度快、重復性好的優點，通過設計型特異性引物和探針，可以快速、準確地區分不同血清型病毒的感染，達到鑒別診斷的目的。

TC07-2型IBV也被稱為GVI-1型(Valastro V,et al.S1 gene-based phylogenyof infectious bronchitis virus:An attempt to harmonize virusclassification.Infect Genet Evol,2016,39:349-364.)，自2007年中國首次報道TC07-2型IBV以來，該型病毒在我國的流行范圍迅速擴大。根據國內多個研究團隊對臨床發病雞群IBV流行病學監測結果顯示TC07-2型IBV分離率目前已經位居第三，說明該型病毒感染所產生的危害日趨嚴重，應當引起足夠重視。因此，本發明旨在提供一種定量檢測TC07-2型IBV的RT-qPCR試劑盒，為監測可能出現的TC07-2型IBV的流行提供技術支持。

發明內容

本發明的目的是提供一種可定量檢測TC07-2型IBV的RT-qPCR試劑盒。

本發明的難點在于選擇的引物和探針結合位點既要在不同基因型IBV毒株間具有較大的差異，以達到特異性區分不同基因型毒株的目的，而且相應序列的堿基組成、Tm值等條件還必須同時滿足qPCR引物和探針設計的要求。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：