[發(fā)明專利]抗新型冠狀病毒的抗體和使用該抗體的免疫檢測

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010463551.7
• 申請日: 2020-05-27
• 公開（公告）號: CN111748032B
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發(fā)明（設計）人: 張黎;高行素;鄭濱洋;孟繁岳;崔侖標;郭喜玲;魏明偉;朱鳳才
• 申請（專利權）人: 江蘇省疾病預防控制中心（江蘇省公共衛(wèi)生研究院）
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 北京預立生科知識產權代理有限公司 11736
• 代理人: 朱萍;孟祥斌

本發(fā)明公開了抗新型冠狀病毒的抗體和使用該抗體的免疫檢測。本發(fā)明還公開了所述抗體的功能性片段，其含有SEQ ID NO.1?3的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)，以及含有SEQ ID NO.5?7的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

技術領域

本發(fā)明屬于細胞免疫學、分子生物學領域，涉及抗新型冠狀病毒的抗體和使用該抗體的免疫檢測。

背景技術

國際病毒分類委員會將新型冠狀病毒命名為SARS-CoV-2，世界衛(wèi)生組織將感染此病毒引起的肺炎稱為COVID-19。此病毒傳染性強，傳播途徑廣。該病毒能迅速適應人體環(huán)境，感染后在潛伏期即具有傳播能力，同時還有一些無癥狀感染者報道，甚至在多種動物體內也檢測到病毒核酸。這些因素使得對該病毒的防控變的非常復雜，而且目前沒有有效治療藥物及疫苗上市。SARS-CoV-2屬于冠狀病毒屬，為單股正鏈RNA病毒，大小約30kb，與SARS-CoV相似性為79％，與蝙蝠體內分離的冠狀病毒(Coronavirus，CoV)相似性最高約88％。SARS-CoV-2具有典型的冠狀病毒特征，病毒包膜上有典型的棘突，形似日冕。核衣殼為螺旋對稱型，主要結構蛋白是核衣殼蛋白(Nucleocapsid protein,NP)，NP全長420個氨基酸。NP在病毒結構蛋白中含量最多，在宿主感染早期大量表達，且免疫原性較強，能引起宿主強烈的免疫應答。因此，NP可作為SARS-CoV-2感染血清學診斷的主要靶標抗原。

由于特異性治療藥物及有效疫苗尚未研發(fā)成功，早期診斷成為防控疫情重要的措施，早期核酸診斷及臨床診斷為確診重要依據。雖然核酸診斷速度快，受采樣的質量的影響大，存在假陽性和假陰性，影響防控措施的落實。部分無癥狀感染者在病程晚期核酸檢測也呈陰性，單憑核酸檢測很容易出現漏診。血清學診斷是檢測病原感染后機體的免疫反應，持續(xù)時間長，免疫反應穩(wěn)定，且免疫反應隨著病程進展呈動態(tài)變化趨勢。因此，血清學診斷同樣也是早期診斷和感染現狀評價的的重要手段。

發(fā)明內容

本發(fā)明所要解決的問題

本發(fā)明的一個要解決的問題是提供一種特異性結合新型冠狀病毒的單克隆抗體。

本發(fā)明的另一個要解決的問題是提供一種含有所述單克隆抗體的免疫診斷用的組合物。

解決技術問題的技術方案

為了簡便且高靈敏度地測定新型冠狀病毒并提高診斷的精度，本發(fā)明制作了多種抗新型冠狀病毒的單克隆抗體用于根據利用免疫測定法測定，選擇特別適于免疫測定法的單克隆抗體，確定重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列和堿基序列，而且分析了6個CDR序列。通過使用本發(fā)明所開發(fā)的兩種抗體，確認到能夠以高靈敏度測定生物樣品中的新型冠狀病毒。

即，本發(fā)明如下所述：

本發(fā)明提供了一種特異性結合新型冠狀病毒的單克隆抗體或其功能性片段，其含有：

(1)由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列組成的重鏈CDRH1；

(2)由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列組成的重鏈CDRH2；

(3)由SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列組成的重鏈CDRH3；

(4)由SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列組成的輕鏈CDRL1；

(5)由SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列組成的輕鏈CDRL2；

(6)由SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列組成的輕鏈CDRL3。

在本發(fā)明具體實施例中，所述單克隆抗體或其功能性片段含有由SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列組成的重鏈可變區(qū)，以及由SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列組成的輕鏈可變區(qū)。