[發(fā)明專利]一種快速檢測百日咳桿菌的試劑盒及檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010453050.0
• 申請日: 2020-05-28
• 公開（公告）號: CN111635950A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 廖生赟
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市億立方生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
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本發(fā)明公開了一種快速檢測百日咳桿菌的試劑盒及其檢測方法。特異的探針與高耐受性聚合酶技術(shù)相結(jié)合，樣本經(jīng)過簡單的加熱處理后可以直接擴增，無需提核酸步驟，減少百日咳樣本的處理樣本的時間。百日咳桿菌檢測的所用的成分制備成干粉制劑，顯著提高了試劑盒的熱穩(wěn)定性，可用于常溫運輸。多成分干粉劑的單管包裝減少了配液的步驟。實驗結(jié)果證明，本發(fā)明所述的試劑盒及其檢測方法，特異性強，靈敏度高，操作簡單，能夠?qū)Π偃湛葪U菌進(jìn)行直接快速準(zhǔn)確的檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及病原體核酸檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速檢測百日咳桿菌的試劑盒及其檢測方法。

背景技術(shù)

百日咳桿菌（Bordetella Pertussis，BP）是百日咳的致病菌，百日咳潛伏期1~2周,發(fā)病早期(卡他期)僅有輕度咳嗽，細(xì)菌此時在氣管和支氣管粘膜上大量繁殖并隨飛沫排出，傳染性最大。1~2周后出現(xiàn)陣發(fā)性痙攣性咳嗽(痙咳期)，這時細(xì)菌釋放毒素，導(dǎo)致粘膜上皮細(xì)胞纖毛運動失調(diào)，大量粘稠分泌物不能排出，刺激粘膜中的感受器產(chǎn)生強烈痙咳，呈現(xiàn)出特殊的高音調(diào)雞鳴樣吼聲，形成的粘液栓子還能堵塞小支氣管導(dǎo)致肺不張和呼吸困難、紫紺，4~6周后逐漸轉(zhuǎn)入恢復(fù)期，陣咳減輕，趨向痊愈。百日咳易致窒息和驚厥，且有較嚴(yán)重的并發(fā)癥，如肺炎、百日咳腦病、心血管系統(tǒng)障礙、營養(yǎng)不良等，是嚴(yán)重威脅人類健康的主要傳染病之一。

目前，臨床上較為常見的百日咳診斷方法為培養(yǎng)方法和血清學(xué)篩查，但百日咳桿菌分離培養(yǎng)難度大，培養(yǎng)周期長，而血清學(xué)篩查存在靈敏性低，特異性不高的缺陷，這些因素限制了上述兩種百日咳桿菌檢測方法在臨床上的應(yīng)用。雖然近年來分子核酸診斷技術(shù)大大加快了臨床檢測，但是在處理樣本過程中，操作仍然比較繁瑣且耗時。并且，已有百日咳桿菌核酸檢測技術(shù)需要通過繁瑣的步驟來提取病原體中的核酸，以滿足PCR反應(yīng)體系的要求，并且使用過程中需要完成多管的配液，不便于使用。另外，已有百日咳桿菌核酸檢測試劑盒需要嚴(yán)格保存在-18℃一下。其運輸依賴于冷鏈物料運輸，運輸成本和保存都不方便。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種快速檢測百日咳桿菌的試劑盒。

本發(fā)明的再一目的是，提供一種一種快速檢測百日咳桿菌的方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：一種快速檢測百日咳桿菌的試劑盒，所述試劑盒包括百日咳特異性引物、特異性檢測探針、高耐受性聚合酶、無菌水和dNTP。

進(jìn)一步地，所述特異性引物位和特異性檢測探針與百日咳桿菌的IS110樣元件IS1663家族轉(zhuǎn)座酶保守基因的序列結(jié)合，能夠與序列相似的霍氏鮑特菌、副百日咳桿菌相區(qū)別。

進(jìn)一步地，所述的特異性引物序列為：SEQ ID NO:1: ATGCGCGTCAACTGCGCGCCTTGTTGACGCGACGCG，SEQ ID NO:2: GCGATGGCCTTGTCGATGGAACCATCGACCAAG。

進(jìn)一步地，所述的特異性檢測探針序列為：SEQ ID NO:3: CTGAGCAAGGATCTGTTGCGTGAGCTCAATCGCAAAGAGAAGAGCCAGTTCAGCC。

進(jìn)一步地，所述的特異性探針序列5’端標(biāo)記的熒光基團(tuán)選自FAM、HEX、VIC、CY5、TET中一種，探針序列3’端標(biāo)記的淬滅基團(tuán)選自TAMRA、MGB、BHQ中一種。

進(jìn)一步地，所述的高耐受性聚合酶為OmniTaq酶。

進(jìn)一步地，所述的特異性引物、所述的特異性檢測探針、所述的高耐受性聚合酶、所述的鹽混合物和所述的dNTP為干粉制劑。

進(jìn)一步地，所述的干粉制劑包裝在一個管子內(nèi)。

一種利用權(quán)利要求1所述試劑盒檢測百日咳桿菌核酸的方法，包括以下步驟：