[發(fā)明專利]一種箭葉淫羊藿種胚組培快繁方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010439560.2
• 申請日: 2020-05-22
• 公開（公告）號: CN111480578B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 梁瓊;張燕君;于淑霞;黃天悅;于東悅;王蘭香
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院武漢植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種箭葉淫羊藿種胚組培快繁方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)干燥后種子的消毒：選取干燥健康飽滿的種子，撕去種子上的種膜，用洗潔精：水＝1：500的溶液清洗，置于震蕩箱中120rpm，震蕩1h，去除其表面附著的灰塵，清水沖洗3～4次除去殘留的洗潔精；移入超凈工作臺，然后用75％的酒精溶液震蕩消毒30s，無菌水沖洗2遍，將種子置于0.1％質(zhì)量濃度的HgCl₂溶液中，120rpm震蕩消毒10min，取出用無菌水漂洗3～4次除去殘留的HgCl₂溶液；然后置于滅過菌的濾紙除去殘留的水分備用；

(2)種子低溫培養(yǎng)：將消毒后的種子接種到播種培養(yǎng)皿上，封口膜密封后，放置于4℃冰箱無菌冷藏培養(yǎng)60天；

所述的播種培養(yǎng)基為：MS 4.74g/L+6-BA 0.5～1.5mg/L+NAA 0.05～0.15mg/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L，pH調(diào)節(jié)至6.5；

(3)誘導外植體生成愈傷組織：挑取冰箱中剛萌芽的種子置于超凈工作臺中，用無菌鑷子與解剖針剝除種皮，取出種胚，并用滅過菌的解剖刀沿種胚縱向輕輕劃傷1道，輕貼于愈傷組織誘導培養(yǎng)基a上；在光強1000～2000lux，14h/天光照條件下進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24～26℃；每三周更換一次培養(yǎng)基，所換培養(yǎng)基配方與原培養(yǎng)基一致，誘導生成愈傷組織；待初步生成愈傷組織后，轉(zhuǎn)接愈傷組織誘導培養(yǎng)基b上，同等光照和溫度條件，促進愈傷組織加速形成；

所述的愈傷組織誘導培養(yǎng)基a為：MS 4.74g/L+6-BA 0.5～1.5mg/L+NAA 0.05～0.15mg/L+TDZ 0.1～0.2mg/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L，pH調(diào)節(jié)至6.5；

所述的愈傷組織誘導培養(yǎng)基b為：MS 4.74g/L+6-BA 1.0～2.5mg/L+NAA 0.1～0.25mg/L+TDZ 0.1～0.2mg/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L，pH調(diào)節(jié)至6.5；

(4)誘導愈傷組織分化出不定芽或叢生芽：誘導產(chǎn)生的愈傷組織轉(zhuǎn)接到芽分化培養(yǎng)基上，在光強1500～2500lux，14h/天光照條件下進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24～26℃，誘導不定芽的形成；

芽的增殖培養(yǎng)：切取單個芽體接種到芽增殖培養(yǎng)基，進行繼代培養(yǎng)，在光強1500～2500lux，14h/天光照條件下進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24～26℃，誘導形成叢生芽；

所述芽分化培養(yǎng)基為：MS 4.74g/L+6-BA 1.0～2.5mg/L+NAA 0.1～0.25mg/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L，pH調(diào)節(jié)至6.5；

所述的芽增殖培養(yǎng)基配方為：MS 4.74g/L+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1～0.25mg/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L，pH調(diào)節(jié)至6.5；

(5)誘導芽體形成須根：無菌條件下切取單個芽體，接種于生根培養(yǎng)基，在光強1500～2500lux，14h/天光照條件下進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24～26℃，形成白色須根；

所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS 4.74g/L+6-BA 1.0～2.5mg/L+NAA 0.1～0.25mg/L+活性炭0.2～0.4g/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L，pH調(diào)節(jié)至6.5；

(6)煉苗、育苗：挑選長勢良好，根系相對發(fā)達的組培苗，在煉苗準備室，揭去組培瓶的蓋子，在光強1500～2500lux，14h/天光照條件下進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24～26℃，空氣濕度60％～80％，煉苗5～7天；洗凈培養(yǎng)基，栽種到田園土：蛭石：泥炭土：腐殖土＝2：1：2：1混合后的基質(zhì)中，蔭棚煉苗30～60天；煉苗結(jié)束后移栽至育苗圃，以每株距12～16cm進行定植，覆土壓實后澆足水，與此同時架設(shè)遮陽率為60％～70％的遮陽網(wǎng)，并注意防蟲、防旱澇。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的箭葉淫羊藿種胚組培快繁方法，其特征在于，

步驟(6)移栽前對育苗圃土壤噴灑百菌清，用百菌清：水＝1：1000的溶液進行消毒。