[發明專利]一株產L-高絲氨酸的谷氨酸棒桿菌突變株的構建與應用

有效

• 申請號: 202010439183.2
• 申請日: 2020-05-22
• 公開（公告）號: CN111471638B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 周景文;陳堅;李寧;曾偉主;堵國成
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/77;C12P13/06;C12R1/15
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一株谷氨酸棒桿菌，其特征在于，以谷氨酸棒桿菌ATCC 13032為出發菌株，敲除編碼調控蛋白McbR、高絲氨酸激酶、轉運蛋白MetD和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶的基因，下調異檸檬酸脫氫酶的表達，過表達轉運蛋白BrnFE、天冬氨酸半醛脫氫酶、高絲氨酸脫氫酶和天冬氨酸轉氨酶aspC，并提高天冬氨酸激酶突變體、丙酮酸羧化酶突變體以及來源于大腸桿菌的天冬氨酸激酶I突變體的表達；

所述天冬氨酸激酶突變體為將Gene ID：1021294所示核苷酸序列編碼的天冬氨酸激酶的第311位的蘇氨酸替換為異亮氨酸；

所述丙酮酸羧化酶突變體為將Gene ID：1018688所示核苷酸序列編碼的丙酮酸羧化酶的第458位的脯氨酸替換為絲氨酸；

所述天冬氨酸激酶I突變體為將Gene ID：945803所示核苷酸序列編碼的天冬氨酸激酶I的第345位的絲氨酸替換為苯丙氨酸。

2.根據權利要求1所述的谷氨酸棒桿菌，其特征在于，所述的調控蛋白McbR的編碼基因的核苷酸序列如Gene ID：1020883所示；所述高絲氨酸激酶的編碼基因的核苷酸序列如Gene ID：1019167所示；所述轉運蛋白MetD的編碼基因的核苷酸序列如Gene ID：1019015所示；所述磷酸烯醇丙酮酸羧激酶編碼基因的核苷酸序列如Gene ID：1020806所示；所述異檸檬酸脫氫酶編碼基因的核苷酸序列如Gene ID：1018663所示；所述轉運蛋白BrnFE編碼基因為Gene ID：1021322與Gene ID：1021321所示基因形成的基因簇；所述天冬氨酸半醛脫氫酶編碼基因的核苷酸序列如Gene ID：1021315所示；所述高絲氨酸脫氫酶編碼基因的核苷酸序列如Gene ID：1019166所示；編碼所述天冬氨酸轉氨酶aspC的核苷酸序列如SEQ IDNO.16所示。

3.一種生產L-高絲氨酸的方法，其特征在于，所述方法是以權利要求1或2所述工程菌為發酵菌株發酵生產L-高絲氨酸。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，將所述工程菌以葡萄糖為底物，發酵生產L-高絲氨酸。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，將所述工程菌在OD600為15~30時加入含有葡萄糖的體系中發酵。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，在25~35℃、170~250 rpm條件下進行發酵。

7.權利要求1或2所述谷氨酸棒桿菌，或權利要求3~6任一所述方法在生物、化學領域制備L-高絲氨酸中的應用。