[發(fā)明專利]一種咽拭子樣本中病原體核酸提取試劑盒及提取方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010438066.4 | 申請日： | 2020-05-21 |
| 公開（公告）號： | CN111534510A | 公開（公告）日： | 2020-08-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 肖理慧;孫鳳娟;王慶專 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海領(lǐng)駿生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 深圳靈頓知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44558 | 代理人： | 陶品德 |
| 地址： | 200030 上海市青浦區(qū)工*** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 咽拭子 樣本 病原體 核酸 提取 試劑盒 方法 | ||
1.一種咽拭子樣本中病原體核酸提取試劑盒及提取方法，其特征在于：所述試劑盒包括蛋白酶處理液、裂解液、納米磁珠、洗滌液和洗脫液；利用該試劑盒進(jìn)行病原體核酸提取的方法如下：
步驟S1：取一新鮮咽拭子樣本于1.5ml離心管中，使用無菌移液槍頭向該離心管中加入300ul生理鹽水和10-40ul蛋白酶處理液，震蕩混勻1min，56℃水浴靜置10min；
步驟S2：取50-200ul步驟S1中的樣本處理液于1.5ml離心管中，使用無菌移液槍頭向該離心管中加入75-300ul裂解液、75-300ul異丙醇和納米磁珠5-20ul，震蕩混勻1min，室溫靜置10min；
步驟S3：將步驟S2中的離心管置于磁力架上30s，待納米磁珠完全吸至管壁之后，使用無菌移液槍頭吸棄上清溶液；
步驟S4：使用無菌移液槍頭向步驟S3離心管中加入300-800ul洗滌液，將該離心管震蕩混勻1min，置于磁力架上30s，待納米磁珠完全吸至管壁之后，使用無菌移液槍頭吸棄上清溶液；
步驟S5：重復(fù)步驟S4一次；
步驟S6：室溫開蓋干燥5-20min直至管內(nèi)無液體殘留；
步驟S7：使用無菌移液槍頭向步驟S6離心管中加入100-200ul洗脫液，56℃水浴5-10min；
步驟S8：將步驟S7離心管震蕩混勻1min，置于磁力架上30s，待納米磁珠完全吸至管壁之后，使用無菌移液槍頭吸取上清至新的離心管，即獲得樣本中的病原體核酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種咽拭子樣本中病原體核酸提取試劑盒及提取方法，其特征在于：步驟S1中所述的蛋白酶處理液濃度為10-200mg/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種咽拭子樣本中病原體核酸提取試劑盒及提取方法，其特征在于：所述蛋白酶處理液包括蛋白酶K，且蛋白酶K濃度為10-50mg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種咽拭子樣本中病原體核酸提取試劑盒及提取方法，其特征在于：所述裂解液包括異硫氰酸胍、碘化鋰、檸檬酸、Tween20，其中異硫氰酸胍濃度為3-5mM，碘化鋰濃度為1-5M，檸檬酸三鈉濃度為50-200mM，Tween 20濃度為1％-5％，所述裂解液pH值為4.0-7.0。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種咽拭子樣本中病原體核酸提取試劑盒及提取方法，其特征在于：步驟S2中所述的納米磁珠添加濃度為50-200mg/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種咽拭子樣本中病原體核酸提取試劑盒及提取方法，其特征在于：所述納米磁珠為包裹有二氧化硅的Fe3O4，所述納米磁珠直徑為200-2000nm，濃度為50-200mg/ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種咽拭子樣本中病原體核酸提取試劑盒及提取方法，其特征在于：所述洗滌液包括Tris-HCL、NaCL和無水乙醇，所述Tris-HC的pH為6.5-8.5，濃度為1-5mM，所述NaCL濃度為10-50mM，所述無水乙醇濃度為40％-80％。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種咽拭子樣本中病原體核酸提取試劑盒及提取方法，其特征在于：所述洗脫液為無菌DEPC水，pH值為7.0-9.0。
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