[發(fā)明專利]對豬瘟野毒及其疫苗、非洲豬瘟病毒、豬非典型瘟病毒鑒別診斷的基因芯片以及檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010436452.X
• 申請日: 2020-05-21
• 公開（公告）號: CN111575407B
• 公開（公告）日: 2023-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張乾義;王琴;趙啟祖;徐璐;夏應(yīng)菊;萬建青;郎洪武;鄒興啟;李翠;朱元源;徐嫄;王兆
• 申請（專利權(quán)）人: 中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6837;C12N15/11;C40B40/06
• 代理公司: 北京唐頌永信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11755
• 代理人: 劉偉;王維

本發(fā)明涉及一種探針組合物，其是用于對豬瘟野毒及其疫苗、非洲豬瘟病毒、豬非典型瘟病毒進行鑒別診斷的探針組合物；本發(fā)明還涉及包含該組合物的基因芯片和試劑盒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及獸醫(yī)診斷技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種對豬瘟病毒及其疫苗、非洲豬瘟病毒、豬非典型瘟病毒進行鑒別診斷的基因芯片以及使用該基因芯片的檢測方法。

背景技術(shù)

豬瘟(Classical?Swine?Fever，CSF)是由豬瘟病毒(Classical?Swine?FeverVirus，CSFV)引起的高度接觸性、致死性傳染病。豬瘟被OIE列為必須報告的動物疫病之一，在中國被列為“一類動物疫病”。非洲豬瘟(African?Swine?fever，ASF)是由非洲豬瘟病毒(African?Swine?fever?virus,ASFV)引起的一種急性，熱性，高度接觸性傳染病，病程短，死亡率高達100％。仔豬先天性震顫，也稱“仔豬抖抖病”或“跳跳病”，是一種由豬非典型瘟病毒(Atypical?porcine?pestivirus，APPV)感染引起仔豬頭部、四肢等局部或全身肌肉表現(xiàn)陣發(fā)性攣縮的一種疾病，可導(dǎo)致仔豬站立困難、吮乳受阻甚至死亡。該病毒于2015年在美國首次從具有CT癥狀的豬血清中發(fā)現(xiàn)，隨后歐洲、中國和加拿大等國家相繼報道在有癥狀的新生仔豬檢測出該病毒，這表明其已在世界范圍內(nèi)流行。目前在我國這3種疾病均有流行，所以對其進行流行病學(xué)檢測及臨床的快速診斷具有十分重要的意義。目前對于豬瘟的防控，我國仍是以接種中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所自主研發(fā)的C株疫苗為主，盡管疫苗的接種對于豬瘟的預(yù)防取得了很大的成果，世界上很多國家也已經(jīng)消滅了豬瘟，但目前臨床上缺少有效的診斷方法可以對豬瘟疫苗接種與野毒感染予以鑒別區(qū)分。而非洲豬瘟在國際上尚無可用的有效疫苗和藥物去治療和預(yù)防

目前，對于豬瘟病毒的檢測方法例如病毒分離培養(yǎng)、免疫熒光檢測和酶聯(lián)免疫吸附試驗等雖然有其成功的應(yīng)用，但在應(yīng)對豬瘟病毒的野毒和疫苗的鑒別診斷問題上，往往一籌莫展。分子生物學(xué)檢測方法雖然能對豬瘟病毒的野毒和疫苗進行區(qū)分，但是這些方法比較費時，操作步驟較為復(fù)雜，且難以適用于大量的樣本檢測。而對于非洲豬瘟病毒和豬非典型瘟病毒的診斷，目前還是以病毒分離及核酸檢測還有血清學(xué)檢測為主。因此，建立一種臨床上區(qū)分豬瘟野毒感染和疫苗免疫同時能鑒別診斷非洲豬瘟和豬非典型瘟病毒的診斷方法十分必要。

發(fā)明內(nèi)容

近年來，基因芯片技術(shù)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，在基因功能表達、致病機理、臨床診斷、藥物開發(fā)、生物學(xué)檢測等研究方面取得突出成效。本發(fā)明立足于基因芯片技術(shù)，針對非洲豬瘟病毒、豬瘟病毒及豬非典型瘟病毒的保守序列選取靶位基因分別設(shè)計了三對區(qū)分這三種不同病毒的檢測引物和另一對鑒別區(qū)分豬瘟野毒及其疫苗的引物及相對應(yīng)的探針，建立了一種可靠、快速的豬瘟野毒及其疫苗、非洲豬瘟病毒、豬非典型瘟病毒鑒別診斷基因芯片檢測方法，并組裝豬瘟野毒及其疫苗、非洲豬瘟病毒、豬非典型瘟病毒鑒別診斷基因芯片檢測試劑盒，為豬瘟野毒及其疫苗、非洲豬瘟、豬非典型性瘟病毒的快速鑒別診斷和規(guī)模化豬場的疫病流行病學(xué)調(diào)查提供技術(shù)支撐。

本申請因而提供了：

1.一種探針組合物，其是用于對豬瘟野毒及其疫苗、非洲豬瘟病毒、豬非典型瘟病毒進行鑒別的探針組合物，其中的靶標探針包括：

針對豬瘟野毒CSFV-W的探針CSFV-W-P，其序列如SEQ.ID.NO.1：CCCTGGGTGGTCTAAGTCCTGAGTACAG所示，

針對豬瘟疫苗CSFV-V的探針CSFV-V-P，其序列如SEQ.ID.NO.2：ATGCAGGAGGAGATAACCTTGCAGCC所示，

針對非洲豬瘟病毒ASFV的探針ASFV-P，其序列如SEQ.ID.NO.3：TCACTACGGCTGATCTTGTGG所示，以及

針對豬非典型瘟病毒APPV的探針APPV-P，其序列如SEQ.ID.NO.4：ATGCCCACGTCCACCCAAGCC所示。