[發(fā)明專利]一種甘草屬藥用親緣關(guān)系的研究方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010435185.4
• 申請日: 2020-05-21
• 公開（公告）號: CN111443154B
• 公開（公告）日: 2023-03-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉育辰;劉剛;袁思文
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京聯(lián)創(chuàng)佳為專利事務(wù)所(普通合伙) 11362
• 代理人: 張梅

1.一種甘草屬藥用親緣關(guān)系的研究方法，其特征在于：包括有建立同時測定不同基源甘草中化學(xué)成分含量，然后建立不同基源甘草雙波長HPLC指紋圖譜，基于不同基源甘草中化學(xué)成分含量和雙波長HPLC指紋圖譜及相似度確定甘草屬藥用親緣關(guān)系；

所述建立同時測定不同基源甘草中化學(xué)成分含量包括有以下步驟；

（1）對照品溶液的制備：精密稱取芹糖甘草苷、甘草苷、芒柄花苷、甘草素、甘草酸、半甘草異黃酮B、光甘草定、芹糖異甘草苷、異甘草苷、刺甘草查爾酮、異甘草素、甘草香豆素、甘草查爾酮A和甘草酚適量分別于50 mL容量瓶中，以50%乙醇溶解并稀釋至刻度，配制成濃度分別為0.0156、0.0319、0.0032、0.0040、0.0816、0.0016、0.0048、0.0101、0.0005、0.0008、0.0040、0.0002、0.0020 mg·mL^-1的混合對照品溶液；

（2）分別取不同基源甘草藥材粉末0.200 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲提取30 min，取出，放置至室溫，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，通過0.22 μm的微孔濾膜，取續(xù)濾液，作為試品溶液；

（3）將試品溶液與混合對照品溶液分別進行液相色譜進樣測定，將色譜對比后，并分別計算出試品溶液中芹糖甘草苷、甘草苷、芒柄花苷、甘草素、甘草酸、半甘草異黃酮B、光甘草定、芹糖異甘草苷、異甘草苷、刺甘草查爾酮、異甘草素、甘草香豆素、甘草查爾酮A和甘草酚的含量；

色譜條件為：

色譜柱：資生堂CAPCELL PAK-C₁₈ MGⅡ250 mm×4.6 mm ID，5μm；

流動相：

Time(min)	乙腈	0.05%醋酸水溶液
0	17	83
22	20	80
30	25	75
45	26	74
62	35	65
75	52	48
88	52	48
105	63	37
120	70	30
130	100	0
140	100	0

流速：0.8 mL·min^-1

檢測波長：265 nm和365 nm

柱溫：30℃

進樣量：20 μL；

所述建立不同基源甘草雙波長HPLC指紋圖譜包括有以下步驟；

（4）分別取不同基源甘草藥材粉末0.200 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲提取30 min，取出，放置至室溫，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，通過0.22 μm的微孔濾膜，取續(xù)濾液，作為試品溶液；

（5）將試品溶液進行梯度洗脫，記錄色譜圖譜，得到265 nm HPLC圖譜和365 nm HPLC圖譜，將265 nm HPLC圖譜和365 nm HPLC圖譜與國家藥典委員會研制的中藥色譜指紋圖譜進行對比，得到不同基源甘草雙波長HPLC指紋圖譜及相似度；

色譜條件為：

色譜柱：資生堂CAPCELL PAK-C₁₈ MGⅡ250 mm×4.6 mm ID，5μm；

流動相：

Time(min)	乙腈	0.05%醋酸水溶液
0	17	83
22	20	80
30	25	75
45	26	74
62	35	65
75	52	48
88	52	48
105	63	37
120	70	30
130	100	0
140	100	0

流速：0.8 mL·min^-1

檢測波長：265 nm和365 nm

柱溫：30℃

進樣量：20 μL。