[發明專利]檢測大環內酯類化合物的代謝物的方法和試劑盒

有效

• 申請號: 202010433868.6
• 申請日: 2020-05-20
• 公開（公告）號: CN111474278B
• 公開（公告）日: 2022-11-01
• 發明（設計）人: 張峰;凌云;王佳;姚美伊
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京鼎真知識產權代理事務所(普通合伙) 11815
• 代理人: 洪波

本發明公開了檢測大環內酯類化合物的代謝物的方法和試劑盒，其中，檢測大環內酯類化合物的代謝物的方法包括：將待測樣品進行提取處理和凈化處理，以便得到待測液；利用超高效液相色譜與四極桿靜電場軌道阱傅里葉轉換聯用質譜聯用系統(UHPLC?Q?Exactive?Orbitrap質譜聯用系統)進行檢測，以便對所述大環內酯代謝物進行定性分析和/或定量分析。該方法采用超高效液相色譜與四極桿靜電場軌道阱傅里葉轉換聯用質譜聯用系統進行檢測，靈敏度和回收率及重現性高，可用于食品等物質中大環內酯類代謝物殘留含量的準確測定。

技術領域

本發明涉及分析化學領域，具體地，涉及檢測大環內酯類化合物的代謝物的方法和試劑盒。

背景技術

大環內酯類是鏈霉菌產生的廣譜抗生素，主要用于臨床和動物的細菌感染。但是，濫用或不合理添加會產生多種毒副作用，例如：消化道癥狀，肝毒性，過敏，心臟毒性，心律不齊和尖銳濕疣。這些化合物很容易在動物體內積累。而且，容易通過食物鏈傳播到人體內，會對消費者構成威脅。如今，食品中的大環內酯類抗生素已成為食品安全研究的主要關注點。

目前，有報道首次在生活和工業廢水中發現3種代謝物，其濃度高達20.1μg/L，可能間接污染農作物和食品。包括了N-去甲基羅霉素，N-去甲基克拉霉素，紅霉素A肟。這3種代謝物因與母體藥物結構相似，因此也有一些毒性和生態毒理作用。到目前為止，尚未開發出研究食品中這3種代謝物的殘留測定方法。

雖然這3種新興的代謝產物在農產品和食品中的藥物濃度較低，但毒性顯著。同時，再加上基質的復雜性，樣品純化方法和高靈敏度儀器分析方法具有極大的挑戰性。因此，有必要開發一種方法來研究這3種化合物的可能的遷移殘留，以有效控制食品中抗生素的遷移。

發明內容

本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明的一個目的在于提出一種檢測大環內酯類化合物的代謝物的方法，操作簡單、靈敏度和回收率及重現性高，該方法尤其適用于3種新興的大環內酯類化合物(紅霉素、克拉霉素和羅紅霉素)的代謝產物。

根據本發明的一個方面，本發明提供了一種檢測大環內酯類化合物的代謝物的方法。根據本發明的實施例，該方法包括：將待測樣品進行提取處理和凈化處理，以便得到待測液；利用超高效液相色譜與四極桿靜電場軌道阱傅里葉轉換聯用質譜聯用系統(UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap質譜聯用系統)進行檢測，以便對所述大環內酯類代謝物進行定性分析和/或定量分析。

其中，本文所用術語“大環內酯類化合物的代謝物”是指大環內酯類抗生素化合物在在體內多種藥物代謝酶(尤其肝藥酶)的作用下，化學結構發生改變，繼而在體內生物轉化成為有藥理活性的代謝物或產生有毒的代謝物，例如，紅霉素A肟、N-去甲基克拉霉素和N-去甲基羅紅霉素這三種代謝物是紅霉素、克拉霉素和羅紅霉素三種大環內酯類化合物的代謝物。

根據本發明實施例的檢測大環內酯類化合物的代謝物的方法，采用超高效液相色譜與四極桿靜電場軌道阱傅里葉轉換聯用質譜聯用系統進行檢測，對大環內酯類化合物的代謝物均有良好的檢測效果，靈敏度和回收率及重現性高，分析速度快，溶劑使用量少，成本低，操作簡便，樣品制備過程中使用的裝置簡單，尤其適用于食品等物質中大環內酯類化合物代謝物殘留含量的準確測定。

根據本發明的實施例，該待測樣品為食品，例如牛奶等復雜基質樣品。對于復雜基質的樣品，發明人發現，通過提取處理和凈化處理，利用吸附劑與基質中的雜質相互作用，吸附雜質從而達到除雜凈化，能快速簡單的去除復雜基質對于待測化合物檢測的干擾，簡化樣品處理程序，提高檢測的靈敏度和準確性。

根據本發明的實施例，所述提取處理包括：將所述待測樣品與提取劑混合，以便得到第一混合物；將所述第一混合物進行超聲處理，以便得到第二混合物；將所述第二混合物進行離心處理，以便得到第一上清液。由此，有利于提高檢測的靈敏性和回收率。