[發(fā)明專利]一種用于氯霉素含量檢測的電化學(xué)傳感器制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010429399.0
• 申請日: 2020-05-20
• 公開（公告）號: CN111398394B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何保山;王森堯;衛(wèi)敏;趙文紅;金華麗;任文潔;王金水;惠明;姜利英;魏濤;吳立根;王濤
• 申請（專利權(quán)）人: 河南工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于氯霉素含量檢測的電化學(xué)傳感器制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）功能化金屬有機框架材料A的制備：采用水熱合成法合成金屬有機框架材料A，稱取0.5~1 g金屬硝酸化合物加入20~60 mL超純水中，超聲氧化分散2~4 h得到溶液a，稱取1~2g 2-甲基咪唑加入10~50 mL超純水中，超聲氧化分散2~4 h得到溶液b，將溶液a加入溶液b中，放置2~4 h，在8000~10000 rpm轉(zhuǎn)速下離心4~7 min，洗滌，于50~80℃干燥2~4 h得到金屬有機框架材料A；用表面沉積交聯(lián)法對金屬有機框架材料A進行氨官能化處理，稱取1~10mg上述所制備的金屬有機框架材料A分散于3~10 mL pH值為7.0的0.02~0.08 mL質(zhì)量百分比為2%~10%的氨基官能化溶液中，在20~23℃下攪拌5~15 h，8000~10000 rpm轉(zhuǎn)速下離心4~7 min，在50~80℃干燥3~7 h即得到功能化金屬有機框架材料A；所述的金屬有機框架材料A為鋅金屬有機框架、鐵金屬有機框架、銅金屬有機框架中的一種或多種；

（2）信號分子標記的金屬有機框架材料B/核酸適配體信號探針鏈的制備：采用水熱合成法合成金屬有機框架材料B，將0.1~0.5 g金屬氯化物和1~10 g十二烷酸溶解在10~100mL的有機溶劑中，超聲混合20~60 min，添加3~15 g H₂N-H₂BDC，超聲5~15 min，在60~120℃下處理24~48 h，在8000~10000 rpm轉(zhuǎn)速下離心4~7 min，用有機溶劑洗滌，在60~120℃下干燥6~12 h得到金屬有機框架材料B；取20~50 mg上述合成的金屬有機框架材料B分散在5~20mL濃度為1~5 mM的信號分子溶液中，于搖床震蕩混合12~36 h，在8000~10000 rpm轉(zhuǎn)速下離心4~7 min，在50~80℃下干燥3~7 h，分散在1~10 mL含有1~5%交聯(lián)劑的磷酸緩沖溶液中，得到信號分子標記的金屬有機框架材料B，取20~50 μL與互補鏈S2部分互補的信號鏈S3至上述溶液中，于30~60℃下孵育60~120 min，在8000~10000 rpm轉(zhuǎn)速下離心4~7 min后分散至1~5 mL磷酸緩沖溶液中，得到信號分子標記的金屬有機框架材料B/核酸適配體信號探針；所述的金屬有機框架材料B為鋯金屬有機框架、鈀金屬有機框架、鈰金屬有機框架中的一種或多種；

（3）金納米粒子/功能化金屬有機框架材料A/核酸適配體金電極的制備：將金電極置于強氧化性溶液中浸泡20~60 min，再將金電極依次用乙醇、二次蒸餾水超聲洗滌5~10 min，取1~10 mg上述功能化處理后的金屬有機框架材料A的分散至1~5 mL超純水中，后取2~5 μL上述溶液滴加至金電極表面，干燥后用二次蒸餾水沖洗，采用電化學(xué)沉積法制備功能化金屬有機框架材料A/金納米粒子復(fù)合材料，將上述處理過的金電極在HAuCl₄溶液中浸泡20~60 min，在-0.2~-0.8 V電位下于磷酸緩沖溶液中電化學(xué)還原10~30 min，沖洗后得到金納米粒子/功能化金屬有機框架材料A金電極；在體外先將10~20 μL 2~5 μM 3'端修飾巰基的氯霉素適體鏈S1與10~20 μL 2~5 μM 5'端修飾巰基的對應(yīng)互補鏈S2形成拱形DNA結(jié)構(gòu)鏈，移取2~4 μL拱形DNA結(jié)構(gòu)鏈滴加至電極表面，30~60℃下孵育60~90 min，移取2~4 μL電極封閉劑滴加至電極表面于30~60℃下孵育30~60 min，得到金納米粒子/功能化金屬有機框架材料A/核酸適配體金電極，然后移取5~10 μL含有不同濃度氯霉素和1~5 U核酸外切酶的混合物滴加至金電極表面于30~60℃下孵育60~120 min，取5~10 μL信號分子標記的金屬有機框架材料B/核酸適配體信號探針鏈滴加至金電極表面于30~60℃下孵育60~120 min，得到金納米粒子/功能化金屬有機框架材料A/核酸適配體金電極；

（4）電化學(xué)傳感器是以金納米粒子/功能化金屬有機框架材料/核酸適配體金電極為工作電極，以鉑絲電極為對電極，飽和氯化銀作參比電極，通過信號分子標記的金屬有機框架材料B/核酸適配體信號探針鏈所帶信號分子響應(yīng)信號的增加指示樣品中氯霉素的含量，得到了用于氯霉素含量檢測的電化學(xué)傳感器。