[發明專利]抗人DLL4人源化抗體與海兔毒素衍生物MMAE的偶聯物及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202010429398.6
• 申請日: 2020-05-20
• 公開（公告）號: CN111544600B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 吳旻;王旻;王世靜;費文儀;趙玉紅;溫慧;馮宇琪;匡璐
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: A61K47/68
• 分類號: A61K47/68;A61K38/07;A61P35/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 唐循文

1.一種抗人DLL4人源化抗體THL4與海兔毒素衍生物MMAE的偶聯物HLvM4，其特征在于：抗人DLL4人源化抗體THL4通過接頭將海兔毒素衍生物MMAE偶聯；其中：抗人DLL4人源化抗體THL4為：抗人DLL4人源化抗體H3L2輕鏈207位纈氨酸和重鏈121位賴氨酸定點突變成半胱氨酸;所述的一種抗人DLL4人源化抗體THL4的重鏈氨基酸序列為SEQ ID NO.1和輕鏈氨基酸序列為SEQ ID NO.2;所述的接頭為Val-Cit。

2.根據權利要求1所述的一種抗人DLL4人源化抗體THL4與海兔毒素衍生物MMAE的偶聯物HLvM4的制備方法，其特征在于：按如下步驟實現：

步驟一：在抗人DLL4人源化抗體H3L2輕鏈207位纈氨酸和重鏈121位賴氨酸定點突變成半胱氨酸，構建工程質粒，表達工程化抗人DLL4抗體THL4；

步驟二：將還原劑TCEP與抗體以10：1的摩爾比混合，還原工程化抗體THL4，打開二硫鍵，樣品于4 ℃反應1小時，脫鹽，收集的抗體與氧化劑dhAA以1:2的摩爾比混合，將上一反應中打開的抗體鏈間二硫鍵還原，樣品于室溫反應3小時，脫鹽；

步驟三：取帶有二肽接頭Val-Cit的毒素MMAE粉末，即vc-MMAE充分溶解在DMSO溶液中，將vc-MMAE溶液與步驟二得到抗體產物以10:1的摩爾比混合進行偶聯反應，置于冰上輕輕攪拌，反應1小時；

步驟四：脫鹽獲得產物THL4-vc-MMAE，即HLvM4。

3.根據權利要求1所述的一種抗人DLL4人源化抗體THL4與海兔毒素衍生物MMAE的偶聯物HLvM4在制備治療癌癥藥物中的應用; 所述癌癥為食管癌、乳腺癌、卵巢癌、結腸癌、白血病、胃癌、肺癌、黑色素瘤、腎癌或經典型霍奇金淋巴瘤。