[發(fā)明專利]一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定血漿中替諾福韋艾拉酚胺濃度的方法

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• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111595967A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 錢曉萍;祁慧昕;孫葉
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州必宜生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
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本發(fā)明公開了一種液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法測定血漿中替諾福韋艾拉酚胺濃度的方法，包括如下步驟：（1）對血漿樣品進行前處理；（2）采用液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法測定經(jīng)前處理后的血漿樣品中替諾福韋艾拉酚胺的濃度；所述液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法包括色譜條件和質(zhì)譜條件，其中：所述色譜條件包括：以含0.1%甲酸的2mM醋酸銨水溶液為流動相A，以體積比為1:1的乙腈?甲醇為流動相B；梯度洗脫，洗脫程序為：0?0.3min，10%B相，0.3?1.5 min，10%?95%B相，1.5?4.0min，95%B相，4.0?4.6min，95%?10%B相，4.6?5.5min，10%B相；洗脫時間為5.5min。采用本發(fā)明的方法可以實現(xiàn)對血漿中替諾福韋艾拉酚胺的快速、靈敏檢測；而且血漿用量少，樣品前處理簡單。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定血漿中替諾福韋艾拉酚胺濃度的方法。

背景技術(shù)

替諾福韋艾拉酚胺（TAF）是一種新型的核苷酸逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，其結(jié)構(gòu)式如下：

是替諾福韋的前提藥物。該藥是吉利德公司已上市藥物Viread?的改良版，目前已被美國批準用于治療成人未失代償期慢性乙肝的治療。

相對于Viread?而言，替諾福韋艾拉酚胺的優(yōu)點十分顯著，其只對靶細胞中的特異性酶敏感，如外周血單核細胞中的組織蛋白酶A及肝細胞中的羧酯酶1，替諾福韋艾拉酚胺的非靶向穩(wěn)定性有助于降低全身暴露量并提高靶細胞中的裝載量，臨床給藥劑量更小，從而提高了藥物的安全性和有效性，使其快速成為治療病毒感染的新一代明星藥物，但目前有關(guān)其血漿檢測和藥動學(xué)的研究報道較少。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定血漿中替諾福韋艾拉酚胺濃度的方法。采用本發(fā)明的方法可以實現(xiàn)對血漿中替諾福韋艾拉酚胺的快速、靈敏檢測；而且血漿用量少，樣品前處理簡單。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定血漿中替諾福韋艾拉酚胺濃度的方法，包括如下步驟：

（1）對血漿樣品進行前處理；

（2）采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定步驟（1）中經(jīng)前處理后的血漿樣品中替諾福韋艾拉酚胺的濃度；

所述液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法包括色譜條件和質(zhì)譜條件，其中：

所述色譜條件包括：以含0.1%（體積百分比）甲酸的2mM醋酸銨水溶液為流動相A，以體積比為1:1的乙腈-甲醇為流動相B；梯度洗脫，洗脫程序為：0-0.3min，10%B相，0.3-1.5min，10%-95%B相，1.5-4.0min，95% B相，4.0-4.6min，95%-10%B相，4.6-5.5min，10% B相；洗脫時間為5.5min；

所述質(zhì)譜條件包括：離子源：電噴霧電離正離子檢測；噴霧氣溫度：550℃；霧化氣：60psi；加熱輔助氣：60 psi；氣簾氣：30 psi；碰撞氣：8 psi；噴霧電壓（IS）：5500 V；掃描時間：100 ms；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。用于定量的離子反應(yīng)分別為：m/z 477.2 ?346.1（替諾福韋艾拉酚胺）和m/z 482.3?351.2（替諾福韋艾拉酚胺-d5）；碰撞能量60 eV。

優(yōu)選的，步驟（1）中，對血漿樣品進行前處理的方法為：向100 μL血漿樣品中加入50 μL內(nèi)標溶液，再加入300 μL乙腈，渦流振蕩5min，4℃條件下以3900 rpm速度離心10min，取上清液100 μL加入300 μL去離子水，混勻后，取20.0 μL進行LC-MS/MS分析。

更優(yōu)選的，所述內(nèi)標溶液為50 ng/mL的替諾福韋艾拉酚胺-d5溶液。