[發(fā)明專利]一種利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育短蔓花期延遲西瓜新種質(zhì)的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010420535.X
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111705074B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 董薇;吳德峰;黃甜;張海燕;朱莉莉
• 申請（專利權(quán)）人: 河南大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/84;C12N15/66;C12N15/29;A01H5/00;A01H5/10;A01H6/34
• 代理公司: 蘇州知途知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32299
• 代理人: 孫占莉

本發(fā)明涉及一種利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育短蔓花期延遲西瓜新種質(zhì)的方法，本發(fā)明還涉及構(gòu)建RNAi的方法，具體通過用DHpart27RNAiFADp1P4載體構(gòu)建含西瓜Cla97C04G079450基因干擾片段的重組干擾載體，然后采用農(nóng)桿菌介導法將構(gòu)建的RNAi載體轉(zhuǎn)化西瓜，篩選得到短蔓、花期延遲的西瓜新種子，本發(fā)明首次公開利用轉(zhuǎn)基因方法成功得到具短蔓、花期推遲并且西瓜品質(zhì)優(yōu)的種質(zhì)資源的技術(shù)，并且得到的短蔓西瓜，短蔓程度更高，在實際應(yīng)用中能夠更加節(jié)約土地資源。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育短蔓花期延遲西瓜新種質(zhì)的方法，本發(fā)明還涉及構(gòu)建RNAi的方法。

背景技術(shù)

轉(zhuǎn)基因技術(shù)是一種新型的育種手段，彌補了傳統(tǒng)育種技術(shù)過程中盲目性大，生長周期長的不足。

RNA干擾(RNA interference，RNAi)，又稱轉(zhuǎn)錄后基因沉默(post-transcriptional gene silencing，PTGS)，是指將特異性同源雙鏈RNA(dsRNA)導入到細胞內(nèi)，使目的基因的不表達或表達水平下降。RNAi技術(shù)可廣泛應(yīng)用到包括功能基因組學，藥物靶點篩選，細胞信號傳導通路分析，疾病治療等。

矮化是植物的一種重要性狀，植物株高性狀既受內(nèi)部基因控制，還受各種激素和外部環(huán)境因素的影響。植物矮化是矮稈主基因表達作用的結(jié)果，同時也受修飾基因和抑制基因的影響。通過矮化育種，降低植株高度，不僅使作物耐肥抗倒，而且改變了株型，可提高收獲指數(shù)。

申請?zhí)枮镃N109468322A的專利公開了一種通過構(gòu)建含有西瓜GlaGA20ox基因序列的RNA干擾載體，通過花粉管通道法創(chuàng)制矮化西瓜新品種，該專利公開的方法只能在室外大田中進行試驗操作，育種方法受時間和空間限制較大，且該方法培育的矮化西瓜有待于進一步優(yōu)化。

《菊花RNAi載體構(gòu)建與青蒿遺傳再生體系的建立》-遺傳學專業(yè)論文，河南大學，2015，公開了以DNA甲基化修飾能影響植物的形態(tài)特征以及RNAi信號能夠通過砧木傳遞，構(gòu)建能夠影響菊花但不影響青蒿MET1基因的RNAi載體，同時建立青蒿的遺傳再生體系的方法，該方法利用的技術(shù)體系僅適用于無性繁殖體系，所利用的是干擾DNA甲基轉(zhuǎn)移酶基因，僅僅能改變植株形態(tài)。

西瓜具有遺傳背景狹窄的特點，利用傳統(tǒng)得方法培育兼具短蔓、花期推遲并且西瓜品質(zhì)優(yōu)的品種非常困難，目前尚未有技術(shù)公開可以通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)成功得到具有短蔓、花期推遲并且西瓜品質(zhì)優(yōu)的種子資源。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的培育短蔓西瓜方法受時間和場地、目前尚無方法能夠通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)成功得到具有短蔓、花期推遲的西瓜種質(zhì)等問題，從而提供一種利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育短蔓花期延遲西瓜新種質(zhì)的方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：首先，本發(fā)明提供了一種含西瓜Cla97C04G079450基因干擾片段的RNAi載體的構(gòu)建方法。

其次，本發(fā)明還提供了一種利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育短蔓花期延遲西瓜新種質(zhì)的方法。

首先，本發(fā)明提供了一種含西瓜Cla97C04G079450基因干擾片段的RNAi載體的構(gòu)建方法，包括：

將含西瓜Cla97C04G079450基因干擾片段的正向序列和反向序列分別添加限制性內(nèi)切酶HindIII、XbaI和KpnI、XhoI的酶切位點；

然后將添加酶切位點的正向序列和反向序列插入用限制性內(nèi)切酶HindIII、XbaI和KpnI、XhoI酶切的DHpart27RNAiFADp1P4載體中，得到所述含西瓜Cla97C04G079450基因干擾片段的RNAi載體，

其中，所述含西瓜Cla97C04G079450基因干擾片段的序列如SEQ ID No.1所示。