[發明專利]一種桉樹組培外植體制備及無菌芽誘導方法

有效

• 申請號: 202010417734.5
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111406650B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 鄧紫宇;劉媛;盧翠香;任世奇;郭東強;唐慶蘭;陳升侃;伍琪;李昌榮;周維;陳健波;甘春雁
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C05G3/60;C05G5/20
• 代理公司: 南寧深之意專利代理事務所(特殊普通合伙) 45123
• 代理人: 盧穎

本發明公開了一種桉樹組培外植體制備及無菌芽誘導的方法，包括優樹選擇，環割促萌，水培促萌，外植體處理和誘導培養工序，選擇桉樹優樹，在離地面20?25cm處進行環割促萌，待萌芽條生長至直徑2?3cm時，剪取60cm長、完全木質化且帶潛伏芽的枝條在培養室中進行水培，待潛伏芽萌發并生長至3?4cm時，剪取莖段作為外植體并進行消毒后，接種于誘導培養基中，置于適宜的環境中進行誘導培養，最后獲得生長健壯、活力旺盛的桉樹無菌芽。本發明降低桉樹組培外植體誘導污染率，無菌芽獲取率高。

技術領域

本發明屬于植物繁殖技術領域，涉及組織培養育苗技術，尤其是一種樹組培外植體制備及無菌芽誘導方法。

背景技術

桉樹是桃金娘科(Myrtaceae)杯果木屬(Angophora)、傘房屬(Corymbia)和桉屬(Eucalyptus)3個屬樹種的統稱，共有808個種和137個亞種或變種，共計945個分類群。天然分布華萊士線以東，北緯7°至南緯43°39′。除剝桉分布在巴布亞新幾內亞、印度尼西亞和菲律賓，尾葉桉、山地尾葉桉和維塔尾葉桉分布于印度尼西亞帝汶島及東部島嶼外，其余全部自然分布于澳大利亞。

大多數桉樹易于無性繁殖，我國從1980年起，對重要桉樹純種、雜交種進行了扦插、組培試驗，均取得成功，尤其在桉樹組織培養方面更為突出，以尾巨桉芽器官為外植體進行組織培養，可不經愈傷組織直接繁殖成苗，并且年繁殖系數達3.512。桉樹組培苗工廠化生產在我國南方發展較快，快繁技術日趨成熟，但外植體誘導階段的污染率較高，無菌芽的獲取效率較低，造成經濟損失較大，因此如何克服污染問題是不可忽視的技術環節。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供一種能降低桉樹組培外植體誘導污染率，無菌芽獲取率高的桉樹組培外植體制備及無菌芽誘導方法。

為了實現上述發明目的，本發明的技術方案如下：

一種桉樹組培外植體制備及無菌芽誘導的方法，包括優樹選擇，環割促萌，水培促萌，外植體處理和誘導培養工序，選擇桉樹優樹，在離地面20-25cm處進行環割促萌，待萌芽條生長至直徑2-3cm時，剪取60cm長、完全木質化且帶潛伏芽的枝條在培養室中進行水培，待潛伏芽萌發并生長至3-4cm時，剪取莖段作為外植體并進行消毒后，接種于誘導培養基中，置于適宜的環境中進行誘導培養，最后獲得生長健壯、活力旺盛的桉樹無菌芽；主要的操作步驟如下：

（1）優樹選擇

選擇樣地內樹高、胸徑、單株材積等生長指標前5%，且無病蟲害、干形通直、分枝小的桉樹個體為優樹；

（2）環割促萌

鏟除優樹周圍雜灌，環割前一天于優樹周圍噴曬75%酒精進行消毒，在優樹離地面20-25cm處進行環割樹周長的3/4，環割寬度2 cm，剝皮并刮盡形成層至韌皮部；

（3）水培促萌

待萌芽條生長至直徑2-3cm時，剪取60cm長、完全木質化且帶潛伏芽的枝條，去除葉片，帶回培養室進行水培，每4天噴灑一次體積濃度2%的綠茶提取物抑菌；

（4）外植體處理

待潛伏芽萌發并生長至3-4cm時，剪取2-3cm莖段作為外植體，將外植體用75%酒精浸泡15s，無菌水清洗2-3次，然后用2%次氯酸鈉浸泡1min，最后用無菌水清洗2-3次，用濾紙吸干，備用；

（5）誘導培養

將步驟（4）處理好的外植體接種到誘導培養基上進行誘導培養，暗培養7d后，在溫度25±2℃，光照12h/d，光照強度1500-2000lux條件下培養20-25d，獲得生長健壯、活力旺盛的桉樹無菌芽。

作為進一步技術改進，以上步驟（3）所述的水培的培養基包括以下組分：每1L培養基中含50mg綠茶提取物，2.5mg核黃素（VB2），其余為純水。