[發明專利]一種17β-雌二醇電化學發光適配體傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 202010417581.4
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111707721B
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 由天艷;劉曉紅;李麗波;羅莉君;畢曉雅
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種17β-雌二醇電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下：

(1)制備NCDs，備用；

(2)將玻碳電極GCE依次用不同粒徑的三氧化二鋁粉末打磨，在乙醇和水中超聲后在空氣中干燥；

(3)將發光體Ru(dcbpy)₃²⁺溶液修飾到步驟(2)制備的GCE表面，并在空氣中干燥；

(4)然后將NCDs的溶液修飾到步驟(3)制備的電極表面，室溫下晾干；

(5)在步驟(4)制備的電極上滴加全氟磺酸溶液，室溫下晾干后形成膜；

(6)將步驟(5)修飾好的電極浸泡在HAuCl₄中，從-0.45V到-0.15V電位下進行電鍍，時間控制在15s到35s內，在電極表面修飾上一層Au粒子(AuPs)，用于連接E2適配體；

(7)在一定溫度下，將巰基功能化的E2適配體反應在步驟(6)修飾好的電極上，通過Au-S共價鍵固定在電極表面，形成自組裝電極；

(8)在一定溫度下，將牛血清白蛋白BSA溶液中修飾在步驟(7)制備的自組裝電極上，以阻斷剩余的非特異性結合位點，制得基于Ru(dcbpy)₃²⁺-NCDs的電化學發光適配體傳感器。

2.根據權利要求1所述的17β-雌二醇電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，NCDs的制備步驟為：

首先，將檸檬酸和尿素加入到二次水中，然后，將溶液置于微波爐中反應，冷卻至室溫后，得到的產物再次溶于二次水，10,000rpm條件下離心15min，得到的上層溶液用0.22μm濾膜過濾，并于60℃下真空干燥，得到固體產物NCDs；

步驟(1)中，檸檬酸、尿素和二次水中的用量比例為4.5g：4.5g：10mL，微波爐功率為800W，反應時間為5min。

3.根據權利要求1所述的17β-雌二醇電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，玻碳電極的直徑d＝3mm；所用的三氧化二鋁粉末的粒徑依次為0.3μm和0.05μm。

4.根據權利要求1所述的17β-雌二醇電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，Ru(dcbpy)₃²⁺的濃度為0.2mM，用量為3μL。

5.根據權利要求1所述的17β-雌二醇電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(4)中，NCDs的溶液的濃度為0.2mg/mL，用量為3μL。

6.根據權利要求1所述的17β-雌二醇電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(5)中，全氟磺酸(Nafion)溶液的濃度為0.5wt％，用量為3μL。

7.根據權利要求1所述的17β-雌二醇電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(6)中，HAuCl₄的質量百分濃度為1％。

8.根據權利要求1所述的17β-雌二醇電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(7)中，巰基功能化的E2適配體的濃度為0.04～0.16μmol/L，用量為6μL；反應溫度為4℃，反應時間為3～10h。

9.根據權利要求1所述的17β-雌二醇電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(8)中，牛血清白蛋白BSA溶液的質量百分濃度為1％；用量為6μL；孵育的溫度為37℃，孵育的時間為10～60min。

10.將權利要求1～9任一項所述制備方法制得的17β-雌二醇電化學發光適配體傳感器用于檢測17β-雌二醇的用途。