[發(fā)明專利]一種提高膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010392323.5
• 申請日: 2020-05-11
• 公開（公告）號: CN111748514B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李志遠(yuǎn);湯鳳;徐浚杰;田超;劉雨杰;黃榮奇
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州浚遠(yuǎn)康生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 胡素麗;劉明星

1.一種提高膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的方法，其特征在于，包括以下步驟：用基質(zhì)膠包被細(xì)胞培養(yǎng)板，得到基質(zhì)膠包被的細(xì)胞培養(yǎng)板，將細(xì)胞復(fù)蘇后進(jìn)行傳代培養(yǎng)，將傳代培養(yǎng)的細(xì)胞接種至基質(zhì)膠包被的細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)，然后將DNA或質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中，將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞加入到玻片上培養(yǎng)后用于膜片鉗實(shí)驗(yàn)；

具體步驟如下：將基質(zhì)膠加入到預(yù)冷的無血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中，混勻后加入到細(xì)胞培養(yǎng)板中孵育，得到基質(zhì)膠包被的細(xì)胞培養(yǎng)板，將細(xì)胞復(fù)蘇后接種到含有10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中進(jìn)行傳代培養(yǎng)，將傳代培養(yǎng)的細(xì)胞接種至添加有含有10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基的基質(zhì)膠包被的細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)，待細(xì)胞融合密度達(dá)到60％-70％時(shí)，將DNA或質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中，將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞用胰酶消化，離心收集細(xì)胞，加入含有10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基重懸，將重懸后的細(xì)胞加入到玻片上培養(yǎng)后用于膜片鉗實(shí)驗(yàn)；

所述的基質(zhì)膠與預(yù)冷的無血清的DMEM/F12培養(yǎng)基的添加比為1:100～200；

所述的細(xì)胞為HEK293T細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的方法，其特征在于，所述的培養(yǎng)的條件為37℃、5％CO₂。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的方法，其特征在于，所述的細(xì)胞培養(yǎng)板為6孔細(xì)胞培養(yǎng)板。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的方法，其特征在于，所述的預(yù)冷的無血清的DMEM/F12培養(yǎng)基為4℃預(yù)冷的無血清的DMEM/F12培養(yǎng)基。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的方法，其特征在于，所述的胰酶的濃度為0.05％。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的方法，其特征在于，所述的用胰酶消化，其消化條件為37℃消化2min。