[發(fā)明專利]一種保護(hù)氨基酸對映異構(gòu)體檢測方法

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• 申請日: 2020-05-11
• 公開（公告）號: CN111505161A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭曉蓉;張松;邱霞;金小林;傅建;趙紹益;管秀君;閆偉
• 申請（專利權(quán)）人: 成都市科隆化學(xué)品有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51214
• 代理人: 胡東東

本發(fā)明公開了一種保護(hù)氨基酸對映異構(gòu)體檢測方法，包括以下步驟：S1、配制對映異構(gòu)體對照品溶液；S2、配制供試品溶液；S3、利用液相色譜法進(jìn)行檢測，檢測條件為：色譜柱：纖維素?三(3,5?二甲基苯基氨基甲酸酯)色譜柱；洗脫條件：采用等度洗脫；流動相：流動相A：三氟乙酸：水＝0.5?1:1000；流動相B：乙腈等步驟。通過改進(jìn)流動相的配方，用毒性較低，成本較低的乙腈替代正己烷、異丙醇，進(jìn)而有效解決原檢測方法中存在的流動相毒性大，檢測成本高的問題，并且同時改進(jìn)色譜檢測條件，使流動相與色譜檢測條件高度匹配，實現(xiàn)了主峰與對映異構(gòu)體的有效分離，分離效果突出，專屬性好，為提高保護(hù)氨基酸質(zhì)量起到了積極作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及保護(hù)氨基酸對映異構(gòu)體檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種保護(hù)氨基酸對映異構(gòu)體檢測方法。

背景技術(shù)

隨著多肽合成的發(fā)展，市場對保護(hù)氨基酸需求越來越大，同時對保護(hù)氨基酸的質(zhì)量要求也越來越嚴(yán)苛，合成多肽的保護(hù)氨基酸絕大多數(shù)含有手性中心，對映異構(gòu)體雜質(zhì)引入肽鏈后，會形成結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與目標(biāo)產(chǎn)物相似的差向肽雜質(zhì)，提純難度較大，需利用有效地檢測分析方法控制保護(hù)氨基酸中潛在的對映異構(gòu)體雜質(zhì)，并建立嚴(yán)格的質(zhì)控要求。

對于保護(hù)氨基酸對映異構(gòu)體的檢測分析方法，工業(yè)應(yīng)用上通常以正己烷、異丙醇、乙醇、三氟乙酸配制成流動相，通過高效液相色譜儀將保護(hù)氨基酸與對映異構(gòu)體分離，以達(dá)到檢測目的。然而，在該檢測分析方法中，正己烷極易揮發(fā)，毒性強對檢測人員傷害大，而且色譜級正己烷、異丙醇價格昂貴，導(dǎo)致保護(hù)氨基酸對映異構(gòu)體檢測成本高，企業(yè)成本投入大，為了保證主峰與對映異構(gòu)體的分離，目前，并無合適的方法能夠替代正己烷、異丙醇等物質(zhì)使用，以降低檢測成本。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的發(fā)明目的在于：針對上述存在的問題，提供一種保護(hù)氨基酸對映異構(gòu)體檢測方法，通過改進(jìn)流動相的配方，用毒性較低，成本較低的乙腈替代正己烷、異丙醇，進(jìn)而有效解決原檢測方法中存在的流動相毒性大，檢測成本高的問題，并且，在改進(jìn)流動相的同時，同時改進(jìn)色譜檢測條件，使流動相與色譜檢測條件高度匹配，實現(xiàn)了主峰與對映異構(gòu)體的有效分離，分離效果突出，專屬性好，目標(biāo)峰表現(xiàn)明顯，易于判斷、計算，為提高保護(hù)氨基酸質(zhì)量起到了積極作用。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：一種保護(hù)氨基酸對映異構(gòu)體檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、配制對映異構(gòu)體對照品溶液，精密稱取保護(hù)氨基酸對映異構(gòu)體，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度線，再精密稱取保護(hù)氨基酸，用稀釋劑溶解，然后加入適量的對映異構(gòu)體溶液，再用稀釋劑稀釋至刻度線，得到對映異構(gòu)體對照品溶液；

S2、配制供試品溶液，精密稱取供試品，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度線，得到供試品溶液；

S3、利用液相色譜法進(jìn)行檢測，檢測條件為：

色譜柱：纖維素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)色譜柱；

洗脫條件：采用等度洗脫；進(jìn)樣量：5-10ul；

流動相：流動相A：三氟乙酸：水＝0.5-1:1000；流動相B：乙腈；

流速：0.8-1.2ml/min；柱溫：20-30℃；運行時間：25-30min；

S4、檢測實驗，采用一針空白溶液、一針對映異構(gòu)體對照品溶液、兩針供試品溶液的方式進(jìn)入色譜系統(tǒng)，然后進(jìn)行檢測實驗，通過面積歸一法對主峰純度和對映異構(gòu)體進(jìn)行計算，得到各組分的峰面積百分比。