[發(fā)明專利]蛋白質(zhì)樣品濃度測定方式選擇法及測定方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010364608.8
• 申請日: 2020-04-30
• 公開（公告）號: CN113588582A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張佳琳;屈晨;黃瞳瞳;徐穎妍;李秀春;李姝蘋;李志國;喬婧;曹曉林
• 申請（專利權(quán)）人: 上海藥明生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N21/31
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 楊昀

1.一種選擇蛋白質(zhì)樣品測定方式及參數(shù)的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)使用可變光程分光光度法(例如SoloVPE)測定樣品中的蛋白質(zhì)濃度，其中測量模式為快速斜率模式(Quick slope mode)，光程點(diǎn)個(gè)數(shù)(Data points)為8～10個(gè)，目標(biāo)吸光度(Target Abs)為0.7～1.5，測得結(jié)果C₁；

若各光程點(diǎn)測得的最大吸光度A_max≤1.5，則選擇采用步驟(1)的可變光程分光光度法和參數(shù)來測定蛋白質(zhì)濃度；若各光程點(diǎn)測得的最大吸光度A_max＞1.5，則進(jìn)行步驟(2)；

(2)采用蛋白質(zhì)樣品中蛋白質(zhì)濃度測定的標(biāo)準(zhǔn)方法(例如使用紫外分光光度法通過稱重稀釋、經(jīng)空白對照校正后測定蛋白質(zhì)濃度)，測得結(jié)果C₂；

(3)比較C₁與C₂的相對差異，根據(jù)以下公式計(jì)算D％值：

D％＝|C₁-C₂|/C₂×100％

若D％不超過預(yù)設(shè)的閾值，例如D％≤2.0％，則選擇采用步驟(1)的可變光程分光光度法和參數(shù)來測定蛋白質(zhì)濃度；若D％超過了預(yù)設(shè)閾值，例如D％＞2.0％，則進(jìn)行步驟(4)；

(4)調(diào)整可變光程分光光度法中所用參數(shù)設(shè)置，將快速斜率模式中的光程點(diǎn)個(gè)數(shù)設(shè)置為5～7，其他參數(shù)保持不變，再次測定蛋白質(zhì)濃度，測得結(jié)果C₃；

(5)比較C₃與C₂的相對差異，根據(jù)以下公式計(jì)算D％值：

D％＝|C₃-C₂|/C₂×100％

若D％不超過預(yù)設(shè)的閾值，例如D％≤2.0％，則選擇采用步驟(4)的可變光程分光光度法和參數(shù)來測定蛋白質(zhì)濃度；如果D％超過了預(yù)設(shè)的閾值，例如D％＞2.0％，則采用步驟(2)的分光光度法來測定蛋白質(zhì)濃度。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，通過以不同濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品重復(fù)所述方法來確定適于所選方式和參數(shù)的樣品濃度范圍。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白質(zhì)為天然蛋白質(zhì)或合成蛋白質(zhì)，例如抗體、酶、激素、膳食蛋白；和/或所述蛋白質(zhì)包含修飾，例如糖基化、甲基化、磷酸化、乙酰化、羥基化修飾；和/或所述蛋白質(zhì)包含非天然氨基酸，例如D-氨基酸、吡咯賴氨酸。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白質(zhì)樣品中的蛋白質(zhì)濃度≥100mg/ml(例如≥120mg/ml、≥150mg/ml、≥180mg/ml、≥200mg/ml、≥250mg/ml、≥300mg/ml、≥400mg/ml、≥500mg/ml)，和/或消光系數(shù)值≥1.3(例如≥1.4、≥1.5、≥1.6、≥1.7、≥1.8、≥1.9、≥2.0)。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述預(yù)設(shè)的閾值范圍為D％≤5.0％、≤4.0％、≤3.0％、≤2.0％、≤1.5％、≤1.0％或≤0.5％。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，可變光程分光光度法測定中采用了SoloVPE儀器，例如所用光纖具有選自下組的一個(gè)或多個(gè)特征的SoloVPE儀器：

材質(zhì)：二氧化硅和/或聚酰亞胺；

長度：57.2mm；

直徑：＜1mm，例如0.7mm；

波長：190nm～1100nm。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的分光光度法為紫外分光光度法，例如采用紫外分光光度計(jì)，如Agilent Cary 100、島津UVmini-1240、普析TU-1810等；和/或

所述步驟(2)中所用樣品池為塑料或石英材質(zhì)。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中稱重稀釋所用稀釋劑和校正所用空白對照均為不含待測蛋白質(zhì)的空白溶液，例如不含待測蛋白質(zhì)的制劑處方溶液。