[發明專利]來源于植物病原真菌的螺縮酮類化合物及制備方法與應用

在審

• 申請號: 202010350603.X
• 申請日: 2020-04-28
• 公開（公告）號: CN111533756A
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發明（設計）人: 劉雪婷;王珍珍;蔣嵐;朱國良;袁偉澤;侯成劍;張敬宇;張立新
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C07D493/10
• 分類號: C07D493/10;A61P31/04;A61P31/10;A61K31/352;C12P17/18;C12R1/645
• 代理公司: 上海順華專利代理有限責任公司 31203
• 代理人: 李鴻儒

1.一類來源于植物病原真菌的螺縮酮類化合物，其特征在于，結構式如下所示：

2.根據權利要求1所述的來源于植物病原真菌的螺縮酮類化合物，其特征在于，所述螺縮酮類化合物是從黑附球菌09116經過發酵培養分離獲得。

3.一種權利要求1或2所述的來源于植物病原真菌的螺縮酮類化合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將固體發酵培養基滅菌，然后將體積百分比為5％的種子液接種于固體發酵培養基，于28℃靜置培養，40d后收獲固體發酵物，固體發酵物為容器內的所有物質，將上述固體發酵物經過分離純化獲得所述來源于植物病原真菌的螺縮酮類化合物。

4.根據權利要求3所述的來源于植物病原真菌的螺縮酮類化合物的制備方法，其特征在于，所述固體發酵培養基為大米：水＝2:3；

所述種子液的制備方法包括以下步驟：在多個玻璃瓶中分別裝入種子培養基，于121℃下滅菌20min，使用含有黑附球菌的平板菌種由平板挖塊接種，于28℃旋轉培養7d，得到種子液。

5.根據權利要求4所述的來源于植物病原真菌的螺縮酮類化合物的制備方法，其特征在于，所述種子培養基由以下成分組成：土豆提取物、葡萄糖、瓊脂和水；以上成分在所述種子培養基中濃度分別為：土豆提取物200g/L、葡萄糖20g/L和瓊脂20g/L；

所述含有黑附球菌的平板菌種的培養方法為：

將平板培養基在121℃下滅菌20min，制成平板，于37℃恒溫培養3d，至表面水分稍干，無雜菌生長時，將黑附球菌09116菌種孢子接種于平板培養基，于28℃培養10d，外觀為肉紅色，氣生菌絲豐滿，無染菌時即可收取使用，即得到平板菌種。

6.根據權利要求5所述的來源于植物病原真菌的螺縮酮類化合物的制備方法，其特征在于，所述平板培養基是由以下成分組成：土豆提取物、葡萄糖、瓊脂和水；以上成分在所述平板培養基中濃度分別為：土豆提取物200g/L、葡萄糖20g/L和瓊脂20g/L。

7.根據權利要求3所述的來源于植物病原真菌的螺縮酮類化合物的制備方法，其特征在于，所述將上述固體發酵物經過分離純化獲得所述來源于植物病原真菌的螺縮酮類化合物包括以下步驟：

將上述得到的固體發酵物經乙酸乙酯提取三遍，提取液過濾去除固體發酵物，收集上清液，將上清液濃縮蒸干，稱重得到粗提物，經硅膠真空液相色譜分離，用二氯甲烷:甲醇按如下比例1：0，100：1，50：1，20：1，10：1，4：1，1：1，0：1對粗提物進行梯度洗脫，共得到10個組份G1-G10，將G5組分進一步用甲醇作為流動相，用Sephadex LH-20柱洗脫，得到23個子組分G5N1-G5N23，亞組分G5N7使用ODS-MPLC進行分離，用10％-100％乙腈水溶液梯度洗脫60分鐘，得到17個組分G5N7M1-G5N7M17，G5N7M15組分通過半制備型RP-HPLC使用YMC-Ph純化，流速為4.0mL/min，使用梯度洗脫液：0min，20％甲醇水溶液；20min，50％甲醇水溶液，得到化合物epicospirocin A和epicospirocin B；G5N7M17組分通過半制備型RP-HPLC使用Cosmosilπ-nap純化，流速為4.0mL/min，使用30％甲醇水洗脫，得到化合物epicospirocinC和epicospirocin D；G5N7M10組分通過半制備型RP-HPLC使用Cosmosilπ-nap純化，流速為4.0mL/min，使用22％乙腈水溶液洗脫，得到化合物epicospirocin E和epicospirocin F；G5N7M12組分通過半制備型RP-HPLC使用Cosmosilπ-nap純化，流速為4.0mL/min，使用35％甲醇水溶液洗脫，得到化合物epicospirocin G和epicospirocin H。

8.一種權利要求1或2所述的來源于植物病原真菌的螺縮酮類化合物在制備抗菌藥物中的應用。