[發(fā)明專利]一種鑒定云蘿卜2號(hào)雜交種子純度的SSR引物及方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010331128.1
• 申請(qǐng)日: 2020-04-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111349716B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-08-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陶婧;李石開(kāi);孫一丁;汪騫;袁藝;鐘秋月
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝作物研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 昆明金科智誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 53216
• 代理人: 胡亞蘭

本發(fā)明提供一種鑒定云蘿卜2號(hào)雜交種子純度的SSR引物SSR06；本發(fā)明還提供了一種鑒定云蘿卜2號(hào)雜交種子純度的方法，包括：步驟1，提取待測(cè)樣品云蘿卜2號(hào)雜交種基因組DNA；步驟2，以步驟1所提取的云蘿卜2號(hào)雜交種基因組DNA作為模板，采用上述SSR引物SSR06進(jìn)行PCR擴(kuò)增；步驟3，將步驟2中的擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，銀染法染色，照相并統(tǒng)計(jì)結(jié)果；步驟4，利用步驟3的統(tǒng)計(jì)結(jié)果計(jì)算云蘿卜2號(hào)雜交種的純度。發(fā)明提供的SSR引物SSR06特異性高，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確；且本發(fā)明的鑒定方法，能快速、準(zhǔn)確、便捷的鑒定雜交種子的純度，克服了田間小區(qū)種植鑒定雜交種純度費(fèi)時(shí)、費(fèi)力的缺點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及雜交種子純度鑒定技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種鑒定云蘿卜2號(hào)雜交種子純度的SSR引物及方法。

背景技術(shù)

蘿卜(Raphanus sativusL.)為十字花科(Brassi-caceae)蘿卜屬(Raphanus)蔬菜，在中國(guó)常年栽培面積僅次于大白菜，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有重要地位。蘿卜的種植區(qū)域廣泛，種植品種多，干制加工型蘿卜是秋冬季云南山區(qū)重要的特色農(nóng)業(yè)支柱產(chǎn)業(yè)，依托云南獨(dú)特的氣候優(yōu)勢(shì)得以迅速發(fā)展。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2018年云南省蘿卜種植面積約為110萬(wàn)畝，主要種植于曲靖、昭通、楚雄、紅河等地區(qū)。近年來(lái)隨著云南省加工型蘿卜條的外銷和出口產(chǎn)值不斷提高，對(duì)加工型蘿卜的條形和品質(zhì)也提出了更高的要求，選育出產(chǎn)量高、品質(zhì)優(yōu)的加工型蘿卜品種也變得更為迫切。云蘿卜2號(hào)是云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝作物研究所選育運(yùn)用雄性不育技術(shù)獲得的雜交一代干制加工型蘿卜品種，具有肉質(zhì)根皮、肉白色、根型長(zhǎng)直、干物質(zhì)含量高、抗病性強(qiáng)、加工品質(zhì)優(yōu)良等優(yōu)點(diǎn)，已在云南省楚雄州、紅河州、陸良縣等干制加工基地規(guī)模化推廣種植，隨著該品種種植面積的不斷擴(kuò)大，種子需求量和制種面積也相應(yīng)增加。云蘿卜2號(hào)雜交種生產(chǎn)過(guò)程中，父母本按照一定比例分行種植，并與其他品種或者類型的十字花科作物保持2000m以上的隔離距離；母本植株開(kāi)花后拔出混雜的可育株，利用昆蟲(chóng)等傳粉媒介或者人工輔助授粉的方式，獲得雜交種子。但制種時(shí)母本中可育株未完全去除、田間隔離措施不完善、收獲前父本沒(méi)有及時(shí)拔出、收獲后其他品種混入都會(huì)導(dǎo)致假雜種的產(chǎn)生。目前田間小區(qū)種植鑒定是干制加工型蘿卜種子純度鑒定的主要手段，存在工作量大、周期長(zhǎng)、易受經(jīng)驗(yàn)和環(huán)境影響等缺點(diǎn)，可能錯(cuò)過(guò)雜交種最佳的銷售和播種時(shí)間。

因此，尋找一種準(zhǔn)確、快速的鑒定雜交種純度的方法是非常重要的，有利于云蘿卜2號(hào)的進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述相關(guān)領(lǐng)域中的不足，本發(fā)明提供一種用于云蘿卜2號(hào)雜交種子純度鑒定的SSR引物SSR06及其鑒定方法。

本發(fā)明的一種鑒定云蘿卜2號(hào)雜交種子純度的SSR引物及方法是通過(guò)以下技術(shù)特征實(shí)現(xiàn)的：

一種鑒定云蘿卜2號(hào)雜交種子純度的SSR引物，其特征在于，所述SSR引物為SSR06，包括上游引物和下游引物；

所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

引物SSR06的上游引物和下游引物的具體單鏈DNA序列從5’到3’端分別為：

上游引物：GAAGCAGATGATTGCAAAACC(SEQ ID NO:1)；

下游引物：CATCCGTTTTGAAGATGGAAA(SEQ ID NO:2)。

一種鑒定云蘿卜2號(hào)雜交種子純度的方法，其特征在于，所述方法包括：

步驟1，提取待測(cè)樣品云蘿卜2號(hào)雜交種基因組DNA；

步驟2，以步驟1所提取的云蘿卜2號(hào)雜交種基因組DNA作為模板，采用所述SSR引物SSR06進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

步驟3，將步驟2中的擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，銀染法染色，照相并統(tǒng)計(jì)結(jié)果；