[發(fā)明專利]一種人脂肪干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010330554.3
• 申請(qǐng)日: 2020-04-24
• 公開（公告）號(hào): CN111471651A
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅亮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775
• 代理公司: 鄭州歐凱專利代理事務(wù)所(普通合伙) 41166
• 代理人: 樊曉坤

本發(fā)明公開了一種人脂肪干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，包括DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加成分，其中添加成分為：人血清白蛋白、B27添加劑或類似物、堿性成纖維生長因子、酸性成纖維生長因子、血小板源生長因子、表皮生長因子、胰島素樣生長因子、肝素、纖粘連蛋白、抗壞血酸磷酸酯鎂鹽、N?乙酰半胱氨酸、慶大霉素和兩性霉素。本發(fā)明人脂肪干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，不含任何血清成分，且成分明確，避免了動(dòng)物血清內(nèi)潛在動(dòng)物源性內(nèi)毒素或病毒將對(duì)人體健康構(gòu)成極大地風(fēng)險(xiǎn)，所含組分均來自重組蛋白或化學(xué)合成，不會(huì)引起人體免疫排斥，解決了應(yīng)用的安全性問題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種人脂肪干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基及其制備方法。

背景技術(shù)

目前常用的人脂肪干細(xì)胞(hADSCs)培養(yǎng)是利用飼養(yǎng)層細(xì)胞與采用含10％胎牛血清的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。這種培養(yǎng)干細(xì)胞方法的缺點(diǎn)是方法復(fù)雜，提取干細(xì)胞數(shù)量少，純度不高，繼代增殖緩慢，更大問題是使用飼養(yǎng)層細(xì)胞和動(dòng)物血清容易導(dǎo)致干細(xì)胞污染，特別是動(dòng)物血清內(nèi)潛在動(dòng)物源性內(nèi)毒素或病毒將對(duì)人體健康構(gòu)成極大地風(fēng)險(xiǎn)，這樣培養(yǎng)出的干細(xì)胞不適于直接應(yīng)用于臨床。因此，開發(fā)一種合適的有效的培養(yǎng)基變的迫在眉睫。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種人脂肪干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，其不含動(dòng)物血清成分，可以完全實(shí)現(xiàn)無血清培養(yǎng)人脂肪干細(xì)胞；采用本發(fā)明無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)人脂肪干細(xì)胞，可在體外獲得高數(shù)量、高純度并且安全優(yōu)質(zhì)的人脂肪干細(xì)胞，同時(shí)可提高細(xì)胞存活率，維持干細(xì)胞的特性。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種人脂肪干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的制備方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明公開的第一個(gè)技術(shù)方案是，一種人脂肪干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，包括DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加成分，其中添加成分為：HSA、B27、bFGF、aFGF、PDGF、EGF、HPS、FN、Vc-Mg、NAC、 Gent-AMP。

進(jìn)一步地，DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基中DMEM培養(yǎng)基與F12培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1：2。

優(yōu)選地，添加成分在DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的含量為：

B27添加劑或類似物：0.5-2×；

HSA：2-50mg/ml；

IGF：1-100ng/ml

bFGF：2-20ng/ml；

aFGF：2-20ng/ml；

PDGF：2-20ng/ml；

EGF：2-20ng/ml；

Vc-Mg：10-100μg/ml

NAC：1-10mg/ml；

HPS：1-10mg/ml；

FN：10-100ug/ml；

慶大霉素：1-20μg/ml；

兩性霉素：1-10μg/ml；

更優(yōu)選地，添加成分在DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的含量為：

HSA：5-25mg/ml；

IGF：2-50ng/ml

bFGF：4-10ng/ml；

aFGF：4-10ng/ml；

PDGF：4-10ng/ml；

EGF：4-10ng/ml；

Vc-Mg：20-50μg/ml