[發(fā)明專利]一種纖維素酶的發(fā)酵方法

在審

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• 申請日: 2020-04-22
• 公開（公告）號(hào): CN111304183A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林元山;向麗蓉;陳流軍;劉其酉
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/42
• 分類號(hào): C12N9/42;C12N1/14;C12R1/885;C12R1/80;C12R1/66
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種纖維素酶的發(fā)酵方法，其特征在于，所述方法是以真菌纖維素酶產(chǎn)生菌為菌種，經(jīng)菌種制備后進(jìn)行固體或液體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶，在進(jìn)行固體或液體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶時(shí)添加銨鹽。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述銨鹽為無機(jī)銨鹽。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述無機(jī)銨鹽包括硫酸銨、硫酸氫銨、氯化銨、硝酸銨、碳酸銨、碳酸氫銨中的至少一種。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，當(dāng)進(jìn)行固體發(fā)酵時(shí)，銨鹽的添加量為固體培養(yǎng)基重量的2.5％-3.5％；當(dāng)進(jìn)行液體發(fā)酵時(shí)，銨鹽的添加量為液體培養(yǎng)基重量的1％-3％。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的具體步驟為：

(1)固體種子制備：將麩皮與水按質(zhì)量比(50％-55％)：(50％-55％)攪拌均勻，于121-124℃滅菌30-40min，得固體發(fā)酵麩皮種子培養(yǎng)基，冷卻后在固體發(fā)酵麩皮種子培養(yǎng)基接種真菌纖維素酶產(chǎn)生菌的新鮮試管斜面菌種，抖松麩曲，于28-32℃條件下靜置培養(yǎng)2-4d，待有白色菌絲長滿麩曲表面時(shí)，即可作為固體發(fā)酵種子；

(2)配制固體發(fā)酵培養(yǎng)基：將纖維秸稈、麩皮、水和銨鹽按質(zhì)量比(20％-35％):(10％-25％):(50％-65％):(2.5％-3.5％)配制，于121-124℃滅菌30-40min，備用；

(3)纖維素酶的發(fā)酵生產(chǎn)：將固體發(fā)酵種子接種至固體發(fā)酵培養(yǎng)基，所述按固體發(fā)酵種子與固體發(fā)酵基本調(diào)控培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:(50-60)，進(jìn)行開放式發(fā)酵，發(fā)酵溫度為22-32℃，發(fā)酵時(shí)間3-5d，期間翻曲若干次，待發(fā)酵培養(yǎng)基麩曲長出白色菌絲后，麩曲開始轉(zhuǎn)色、并初步形成孢子時(shí)，終止發(fā)酵，用水浸提、壓榨過濾，得到纖維素酶粗酶液，并測定、比較粗酶液的纖維素酶活力；

(4)纖維素酶的純化、濃縮：將步驟(3)制得的纖維素酶粗酶液經(jīng)硅藻土預(yù)涂，2級板框過濾，再經(jīng)截留分子量10000Da的超濾膜濃縮，制成內(nèi)切纖維素酶活力≥1000IU/mL的纖維素酶濃縮液；

(5)纖維素酶的精濾、防腐、包裝：將步驟(4)制得的纖維素酶濃縮液經(jīng)膨潤土預(yù)涂，添加苯甲酸鈉、山梨酸鉀、穩(wěn)定劑，再經(jīng)2級板框精濾，制成內(nèi)切纖維素酶活力≥1000IU/mL的工業(yè)級纖維素酶，經(jīng)包裝為成品；所述苯甲酸鈉與纖維素酶濃縮液的質(zhì)量百分比為0.25％-0.35％，所述山梨酸鉀與纖維素酶濃縮液的質(zhì)量百分比為0.15％-0.25％，所述穩(wěn)定劑與纖維素酶濃縮液的質(zhì)量百分比為0.05％-0.15％。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述纖維秸稈為水稻秸稈、甘蔗渣、玉米秸稈、棉花秸稈中的至少一種粉碎成10-40目。