[發(fā)明專利]牛細(xì)粒棘球蚴病的特異性檢測抗原及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010318147.0
• 申請日: 2020-04-21
• 公開（公告）號: CN111518188B
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳啟軍;楊娜;姜寧;丁瑩瑩;桑曉宇;馮穎;陳冉;王新一
• 申請（專利權(quán)）人: 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 北京知呱呱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11577
• 代理人: 杜立軍

本發(fā)明公開了牛細(xì)粒棘球蚴病的特異性檢測抗原及其應(yīng)用，所述牛細(xì)粒棘球蚴病的特異性抗原是如下(a1)或(a2)的蛋白質(zhì)：(a1)氨基酸序列如SEQ ID.1所示的蛋白質(zhì)；(a2)將(a1)限定的蛋白質(zhì)的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加，具有絲氨酸蛋白酶抑制劑作用且可與牛細(xì)粒棘球病血清抗體特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。本發(fā)明表達(dá)了Kazal?type serine protease inhibitor domain?containing protein重組蛋白，并作為試紙條檢測線包被抗原；同時，通過時間分辨熒光免疫層析技術(shù)結(jié)合了免疫標(biāo)記和免疫層析的特點(diǎn)，以時間分辨熒光微球作為示蹤物，制備免疫層析試紙條在臨床上操作簡單、診斷快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及牛細(xì)粒棘球蚴病的特異性檢測抗原及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

細(xì)粒棘球蚴病為一種嚴(yán)重的全球性的人畜共患病，人或反芻動物主要通過誤食了細(xì)粒棘球絳蟲排出的蟲卵而發(fā)病，被稱為“蟲癌”。目前，關(guān)于細(xì)粒棘球蚴病診斷技術(shù)的研究投入較少，最常用的診斷方法就是解剖查看蟲體檢查，隨著分子技術(shù)和免疫技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在有分子診斷，比如LAMP，免疫學(xué)診斷，如ELISA試劑盒法、膠體金等，但從臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，這些方法檢測的準(zhǔn)確性不高、方便性不強(qiáng)，無法便于基層工作者操作檢測。動物感染細(xì)粒棘球蚴時，傳統(tǒng)的診斷方法為屠宰時診斷，然而，在屠宰過程中，典型的囊狀組織也許是炎性導(dǎo)致的肉芽腫，導(dǎo)致診斷錯誤；血清學(xué)診斷包括膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫吸附試驗。這些方法通常使用的是天然棘球囊液，但使用天然棘球囊液的缺點(diǎn)是易于其他患病動物的血清發(fā)生交叉反應(yīng)，制備昂貴且難以進(jìn)行商品化。雖然，細(xì)粒棘球蚴病在人類診斷方面已有很多研究，但在診斷動物方面的研究甚少，且動物在自然感染該病時，抗體反應(yīng)不明顯，易導(dǎo)致診斷錯誤。因此提高細(xì)粒棘球蚴的免疫診斷，尋找一種可靠的抗原，建立一種高效、準(zhǔn)確、特異性好而又簡便的診斷技術(shù)至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容

為此，本發(fā)明提供一種牛細(xì)粒棘球蚴病的特異性檢測抗原及其應(yīng)用。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

蛋白質(zhì)，如下(a1)或(a2)的蛋白質(zhì)：

(a1)氨基酸序列如SEQ ID.1所示的蛋白質(zhì)；

(a2)將(a1)限定的蛋白質(zhì)的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加，具有絲氨酸蛋白酶抑制劑作用且可與牛細(xì)粒棘球病血清抗體特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。

編碼上述所述的蛋白質(zhì)的核酸分子也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

所述核酸分子是編碼所述的蛋白質(zhì)的基因，所述基因是如下任一所述的DNA分子：

(b1)編碼序列如SEQ ID NO.2所示的DNA分子；

(b2)在嚴(yán)格條件下與(b1)限定的DNA分子雜交且編碼權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)的DNA分子；

(b3)與(b1)或(b2)限定的DNA分子具有90％以上同源性且編碼權(quán)利要求1所述的蛋白的DNA分子。

上述所述的蛋白質(zhì)在制備檢測牛細(xì)粒棘球蚴病的免疫層析試紙條中的應(yīng)用，其中，所述試紙條包括底板、以及位于所述底板上依次固定連接樣品墊、結(jié)合墊、設(shè)有檢測線和質(zhì)控線的硝酸纖維素膜和吸水墊，所述檢測線靠近所述結(jié)合墊一端，所述質(zhì)控線靠近所述吸水墊一端，所述檢測線處包被有權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)；

所述結(jié)合墊上包被有微球標(biāo)記的抗牛IgG的抗體；

所述質(zhì)控線處包被有兔抗山羊IgG抗體。

所述檢測抗原為在SEQ.ID.1所示的氨基酸序列的氨基末端添加6個組氨酸的蛋白。

所述檢測線處抗原蛋白質(zhì)的包被濃度為1mg/mL。