[發(fā)明專利]一種法夫酵母補糖培養(yǎng)基及其進行高密度培養(yǎng)的方法和應用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010315021.8
• 申請日: 2020-04-21
• 公開（公告）號: CN113528358A
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳克杰;孫新強;楊一恭;陳迎迎;周旭燕;邵東;徐作武;王小平
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P23/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京乾誠五洲知識產(chǎn)權(quán)代理有限責任公司 11042
• 代理人: 付曉青;李廣文

1.一種法夫酵母補糖培養(yǎng)基，其特征在于，所述補糖培養(yǎng)基為有利于細胞增殖的碳源和有利于蝦青素合成的碳源組成的混合碳源。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的補糖培養(yǎng)基，其特征在于，所述有利于細胞增殖的碳源的濃度與所述有利于蝦青素合成的碳源的濃度的比例為1：3～3：1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的補糖培養(yǎng)基，其特征在于，所述補糖培養(yǎng)基的濃度為320～800(g/L)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的補糖培養(yǎng)基，其特征在于，所述有利于細胞增殖的碳源包括糖蜜、和選自葡萄糖、麥芽糖和蔗糖中的一種或多種；所述有利于蝦青素合成的碳源包括選自麥芽糊精、淀粉水解液、甘油和可溶性淀粉中的一種或多種。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的補糖培養(yǎng)基，其特征在于，所述有利于細胞增殖的碳源為糖蜜和葡萄糖的組合碳源。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的補糖培養(yǎng)基，其特征在于，所述有利于蝦青素合成的碳源為麥芽糊精。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的補糖培養(yǎng)基，其特征在于，所述糖蜜濃度為20～100(g/L)。

8.一種利用權(quán)利要求1～7任一所述的法夫酵母補糖培養(yǎng)基進行高密度培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述高密度培養(yǎng)方法包括如下步驟：

a)固體培養(yǎng)：將法夫酵母冷凍甘油保藏液平板劃線培養(yǎng)，以獲得單菌落；

b)種子瓶培養(yǎng)：在固體平板上挑取單菌落，進行一級種子瓶培養(yǎng)和二級種子瓶培養(yǎng)；

c)種子罐培養(yǎng)：將種子瓶培養(yǎng)液接種種子罐，進行一級種子罐培養(yǎng)或二級種子罐培養(yǎng)；

d)發(fā)酵罐培養(yǎng)：將種子罐培養(yǎng)液移種發(fā)酵罐，通入壓縮空氣，采用兩階段補糖工藝補加碳源，并控制相關(guān)環(huán)境和生理等工藝參數(shù)，獲得高產(chǎn)量蝦青素法夫酵母培養(yǎng)液。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，步驟d)中，所述兩階段補糖工藝包括如下步驟：

I)分批培養(yǎng)：發(fā)酵起始到基礎(chǔ)料碳源消耗完畢，溶氧上升到60～80％以上期間，不補料；

II)指數(shù)補料：溶氧上升到60～80％以上之后，按指數(shù)補料補加補糖培養(yǎng)基，控制比生長速率μ為0.02～0.10h^-1，每0.5～2.0h改變補料速率，補料速率按以下公式計算：

F＝μV₀ρ_c0e^μt/[Y_X/S(ρ_SF-ρ_S)]，其中：

F為補料速率(L/h)；

μ為所設(shè)定的酵母比生長速率(h^-1)；

V₀為補料開始罐內(nèi)培養(yǎng)基體積(L)；

ρ_c0為開始補料時罐內(nèi)菌體質(zhì)量濃度(g/L)；

Y_X/S為菌體得率(％)；

ρ_SF為補料培養(yǎng)基的總糖質(zhì)量濃度(g/L)；

ρ_S為開始補料時罐內(nèi)總糖質(zhì)量濃度(g/L)；

t為指數(shù)補料時間(h)；

III)DO-STAT補料：指數(shù)補料至指數(shù)補料后期，發(fā)酵液中檢測到1～10g/L乙醇時，將補料方式改為DO-STAT補料，DO-STAT補料溶氧關(guān)聯(lián)值為20～60％，當溶氧低于設(shè)定值時停止補糖，當溶氧高于設(shè)定值時開始補糖。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述方法，其特征在于，一級種子瓶、二級種子瓶培養(yǎng)溫度為17～24℃，搖床轉(zhuǎn)速為150～250rpm；一級種子瓶培養(yǎng)時間為36～72h，二級種子瓶培養(yǎng)時間為24～48h；種子培養(yǎng)基含有如下成份(g/L)：葡萄糖20、麥芽浸粉6、蛋白胨10、酵母浸粉6、CaCl₂0.1、KH₂PO₄ 1、MgSO₄·7H₂O 0.5、泡敵0.2；所述種子培養(yǎng)基的消前pH值為5.0～6.5。