[發(fā)明專利]一種高通量藥敏檢測(cè)試劑盒及其使用方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010313836.2
• 申請(qǐng)日: 2020-04-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111500670A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 阮奔放
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州伽瑪生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/18
• 分類號(hào): C12Q1/18;C12Q1/04;C12M1/34;C12R1/32
• 代理公司: 北京睿智保誠(chéng)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

本發(fā)明屬于藥物篩選技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明提供了一種高通量藥敏檢測(cè)試劑盒及其使用方法和應(yīng)用。本發(fā)明的高通量藥敏檢測(cè)試劑盒，包括培養(yǎng)容器、培養(yǎng)基和檢測(cè)試劑，所述檢測(cè)試劑是包括吩嗪甲基硫酸鹽衍生物和含四氮唑鹽的氧化試劑的混合物。本發(fā)明提供的高通量藥敏檢測(cè)試劑盒具有快速精準(zhǔn)、經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便、安全無(wú)毒、可以目測(cè)、臨床相關(guān)性高的特點(diǎn)，使用方法簡(jiǎn)單，具有較高的精準(zhǔn)性、靈敏性，且能夠一次性篩查大量的抗菌藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥敏檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種高通量藥敏檢測(cè)試劑盒及其使用方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

結(jié)核病(Tuberculosis，TB)是由結(jié)核分枝桿菌所引起的一種慢性空氣傳染疾病，雖然結(jié)核分枝桿菌主要是侵染肺部，但是它幾乎可以侵入人體全身的各種器官，它一直是威脅全球人類健康的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。非結(jié)核分枝桿菌(Nontuberculosismycobacteria，NTM)是指除結(jié)核桿菌及麻風(fēng)桿菌以外的所有分枝桿菌，也稱為環(huán)境分枝桿菌。非結(jié)核分枝桿菌廣泛存在于自然界的土壤、塵埃、水、魚類和家禽中，傳播途徑主要是從環(huán)境中獲得感染，例如污水，而人與人之間的傳染極少見(jiàn)。非結(jié)核分枝桿菌屬于條件致病菌，健康人的呼吸道可有某些類型的非結(jié)核分枝桿菌寄植，當(dāng)口腔和呼吸道衛(wèi)生狀況改善后可消失。通常非結(jié)核分枝桿菌對(duì)人類致病性較結(jié)核分枝桿菌低，但如果存在易感因素，使宿主局部或全身免疫功能發(fā)生障礙，也可導(dǎo)致病變。迄今為止，結(jié)核病已有幾千年的歷史，隨著環(huán)境的改變耐藥結(jié)核桿菌也隨之出現(xiàn)，而在過(guò)去的40年中卻未開(kāi)發(fā)出能有效殺滅耐藥菌株的新型抗結(jié)核藥物，未來(lái)數(shù)年內(nèi)可能會(huì)出現(xiàn)以耐藥甚至耐多藥結(jié)核桿菌為主的結(jié)核病的流行趨勢(shì)，全球醫(yī)療工作者將會(huì)面臨更加嚴(yán)重的挑戰(zhàn)。

目前現(xiàn)有的結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌的藥敏檢測(cè)方法主要是細(xì)菌培養(yǎng)法和分子生物學(xué)方法。(1)細(xì)菌培養(yǎng)法主要分為固體培養(yǎng)和液體快速培養(yǎng)。固體培養(yǎng)法主要是利用羅氏固體培養(yǎng)基，將菌種接種到固體斜面上，置于37℃培養(yǎng)，按時(shí)間進(jìn)行觀察，根據(jù)菌落形態(tài)，初次生長(zhǎng)的時(shí)間，以及是否產(chǎn)生色素等特點(diǎn)來(lái)進(jìn)行判斷是否為結(jié)核分枝桿菌。此法是目前全球普遍采用的細(xì)菌分離培養(yǎng)法，方法簡(jiǎn)便，但是由于細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢，導(dǎo)致其耗時(shí)長(zhǎng)，一般要4～8周才能報(bào)道結(jié)果，而且其特異性差，不利于臨床初斷。近年來(lái)，以液體培養(yǎng)法為基礎(chǔ)的細(xì)菌培養(yǎng)方法得到了廣泛的應(yīng)用。目前，常用的自動(dòng)檢測(cè)儀器有BACTEC MGIT 960系統(tǒng)、BacT/ALERT 3D微生物檢測(cè)系統(tǒng)、Versa TREK/ESP培養(yǎng)系統(tǒng)Ⅱ等。上述液體培養(yǎng)法雖然縮短了培養(yǎng)時(shí)間，提高了靈敏性，但是也存在判定方法不直觀、污染率高、價(jià)格昂貴、工作量大的缺點(diǎn)，限制了一些中小型的實(shí)驗(yàn)室以及高負(fù)擔(dān)資源的國(guó)家采用這些設(shè)備。(2)分子生物學(xué)方法。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其在分枝桿菌中的應(yīng)用也不斷增多，目前臨床診斷實(shí)驗(yàn)室最常用的分子生物學(xué)技術(shù)有核酸雜交探針、線性雜交檢測(cè)、DNA測(cè)序等。但是分子生物學(xué)方法步驟繁多，每個(gè)藥的檢測(cè)成本高。比色法檢測(cè)多步操作，在微孔板中進(jìn)行，精準(zhǔn)度不高。可見(jiàn)，現(xiàn)有的結(jié)核病的藥敏檢測(cè)方法均存在一些缺陷。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種高通量藥敏檢測(cè)試劑盒及其使用方法和應(yīng)用，本發(fā)明的藥敏檢測(cè)試劑盒具有高通量、快速精準(zhǔn)、經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便、安全無(wú)毒、可以目測(cè)、臨床相關(guān)性高的特點(diǎn)，能夠發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)方法發(fā)現(xiàn)不了的異質(zhì)性耐藥。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

一種高通量藥敏檢測(cè)試劑盒，包括培養(yǎng)容器、培養(yǎng)基和檢測(cè)試劑，所述檢測(cè)試劑是包括吩嗪甲基硫酸鹽衍生物和含四氮唑鹽的氧化試劑的混合物。

優(yōu)選的，所述檢測(cè)試劑中所述含四氮唑鹽的氧化試劑的濃度為0.001～10mM，所述吩嗪甲基硫酸鹽衍生物的濃度為0.1～250μM。

優(yōu)選的，所述含四氮唑鹽的氧化試劑在氧化還原后具有吸光度或熒光度，所述含四氮唑鹽的氧化試劑為單磺酸四氮唑鹽、羧酸四氮唑鹽、2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽、3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽和四氮唑藍(lán)鹽中的一種。