[發(fā)明專利]一種Caco-2細胞單層膜形成培養(yǎng)方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010300968.1 | 申請日： | 2020-04-16 |
| 公開（公告）號： | CN111500543B | 公開（公告）日： | 2023-05-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 冷毅斌;吳娟;李弘澤;嚴睿韜;寇小娟 | 申請（專利權(quán)）人： | 武漢普諾賽生命科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/09 | 分類號： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 武漢藍寶石專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42242 | 代理人： | 趙紅萬 |
| 地址： | 430000 湖北省武漢市武漢東湖新技術(shù)開發(fā)*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 caco 細胞 單層 形成 培養(yǎng) 方法 | ||
1.一種Caco-2細胞單層膜形成培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1、用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞至匯合度達到60％-70％，去除培養(yǎng)基并加入胰酶消化3-5min，再加入完全培養(yǎng)基，輕柔地充分吹打細胞，獲得單細胞懸液，按體積比例均分至兩份進行下一次傳代培養(yǎng)；
S2、按照步驟S1方法進行多次傳代培養(yǎng)；
S3、待細胞培養(yǎng)到對數(shù)生長期，去除培養(yǎng)基并加入胰酶消化3-5min，再加入完全培養(yǎng)基，輕柔地充分吹打細胞；
S4、細胞計數(shù)，在培養(yǎng)板上接種細胞，其中，所述接種為過量接種，所述過量接種為6孔板時接種量為1×106-2×106/孔、12孔板時接種量為5×105-1×106/孔或24孔板時接種量為2×105-5×105/孔；
S5、待細胞貼壁展開后，用PBS清洗未貼壁細胞，即得到單層膜細胞。
2.如權(quán)利要求1所述的Caco-2細胞單層膜形成培養(yǎng)方法，其特征在于：所述完全培養(yǎng)基為含20％v/v胎牛血清、1％v/v青霉素/鏈霉素的MEM培養(yǎng)基。
3.如權(quán)利要求1所述的Caco-2細胞單層膜形成培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟S2中，所述傳代培養(yǎng)次數(shù)為2-3次。
4.如權(quán)利要求1所述的Caco-2細胞單層膜形成培養(yǎng)方法，其特征在于：所述培養(yǎng)條件為37℃、5％CO2恒溫靜置培養(yǎng)。
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