[發(fā)明專利]兩步法制備納米多孔金及用于非小細(xì)胞肺癌耐藥相關(guān)微小RNA(let-7a)檢測(cè)

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010271409.2
• 申請(qǐng)日: 2020-04-09
• 公開（公告）號(hào): CN111579610A
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭艷潔;翁少煌;許奕純;陳莉;林麗清;劉愛林;林新華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/327
• 分類號(hào): G01N27/327;G01N27/48
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

本發(fā)明公開一種兩步法制備納米多孔金及用于非小細(xì)胞肺癌耐藥相關(guān)微小RNA(let?7a)檢測(cè)。其特征是采用由低頻至高頻的方波伏安法刻蝕金電極表面以制備納米多孔金（NPG）膜修飾金電極，以硫堇(Th)為電化學(xué)雜交指示劑，根據(jù)電信號(hào)差異判斷待測(cè)液中是否含有l(wèi)et?7a并實(shí)現(xiàn)其定量分析。本方法采用的兩步方波伏安法具有制備過程簡單、快速、綠色等優(yōu)點(diǎn)，制備的納米多孔金界面具有良好的導(dǎo)電性、電催化能力及生物相容性，且大的表面積可以增加捕獲探針的固定量，基于此電極所構(gòu)建的電化學(xué)生物傳感器具有選擇性好和靈敏度高的特點(diǎn)，與傳統(tǒng)方法比較，更為快捷、簡便、經(jīng)濟(jì)、且電極耗損小。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基于兩步方波伏安法制備納米多孔金膜修飾金電極并用于非小細(xì)胞肺癌耐藥相關(guān)微小RNA(let-7a)檢測(cè)的方法。

背景技術(shù)

在臨床基因診斷及監(jiān)測(cè)方面，電化學(xué)DNA生物傳感器均具有操作簡單、檢測(cè)速度快、靈敏度高、特異性好、有望進(jìn)行高通量生物分析等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于特定DNA序列或與疾病有關(guān)的突變基因的檢測(cè)。與傳統(tǒng)生物傳感標(biāo)記技術(shù)相比，免標(biāo)記法檢測(cè)無需對(duì)待測(cè)樣本（如DNA或蛋白分子）進(jìn)行化學(xué)修飾或者標(biāo)記物插入等可能影響樣品環(huán)境的前期處理，可彌補(bǔ)其標(biāo)記困難、操作繁瑣和價(jià)格昂貴等不足。將免標(biāo)記技術(shù)與電化學(xué)生物傳感技術(shù)相結(jié)合，并將具有優(yōu)異性能納米材料引入到生物傳感器中，可進(jìn)一步提高傳感器的檢測(cè)靈敏度與選擇性。

納米多孔金（NPG）是近年來出現(xiàn)的一種納米多孔材料，多孔化賦予了原來材料嶄新的性能，空隙結(jié)構(gòu)使材料具有很多優(yōu)異的物理化學(xué)性能，如較高的比強(qiáng)度、較低的熱導(dǎo)率、較大的比表面積及較高的吸附性能等特點(diǎn)，這些性能方面的延伸，使多孔材料彌補(bǔ)了致密材料在應(yīng)用上的局限，受到人們的廣泛關(guān)注；同時(shí)，納米金材料具有許多傳統(tǒng)材料無法比擬的功能和特性。結(jié)合多孔結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)和納米金性能上的優(yōu)勢(shì)，納米多孔金不僅保留了利于分子在結(jié)構(gòu)內(nèi)部傳輸?shù)倪B續(xù)多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，而且具備了金屬金本身良好導(dǎo)電性及優(yōu)越的催化性能，因此，與單純的多孔材料或納米金顆粒相比，納米多孔金在生物化學(xué)，大分子催化，分子識(shí)別，納米材料組裝，DNA電化學(xué)傳感及色譜載體等領(lǐng)域有著更廣泛的應(yīng)用。

現(xiàn)有的納米多孔金制備方法主要有化學(xué)腐蝕合金法，電化學(xué)腐蝕法，電化學(xué)合金/腐蝕法，電化學(xué)沉積法，電化學(xué)氧化/化學(xué)還原法、模板合成法和方波伏安法（SWORC）等。在這些方法中，方波伏安法由于其簡單，省時(shí)和可控的納米多孔金制備而非常有吸引力。

方波伏安法在制備納米多孔金材料方面具有比較突出的優(yōu)點(diǎn)，如簡便、快速、反應(yīng)條件溫和可控、產(chǎn)物純度高(無其他試劑引入)、適用范圍廣、對(duì)環(huán)境不造成污染、且通過參數(shù)的調(diào)整能夠更好地控制納米粒子的尺寸和形貌等，源于這些優(yōu)點(diǎn)，方波伏安法成為一種重要的電極表面處理方法，在制備納米多孔金電極上具有巨大的應(yīng)用潛力。現(xiàn)有的文獻(xiàn)報(bào)道方波伏安法制備納米多孔金電極時(shí)設(shè)置的參數(shù)中頻率通常選擇2000 Hz甚至更高，在電位范圍及電位間隔參數(shù)不變的前提下，反應(yīng)頻率越高其處理時(shí)間越短，通常在不到1秒完成反應(yīng)，參照文獻(xiàn)報(bào)道維持高頻刻蝕5分鐘的要求，實(shí)驗(yàn)中需對(duì)電極進(jìn)行反復(fù)多次的刻蝕，多次刻蝕可使電極表面劃痕增多，導(dǎo)致后續(xù)反應(yīng)中多孔金形成的無序性概率增加，界面形貌隨機(jī)性直接影響到后期測(cè)定結(jié)果的重現(xiàn)性。因此，對(duì)于有一定程度損耗的電極，如何提高其使用性能方便于再次使用制備出均勻且規(guī)則納米多孔金，盡可能減少多次重復(fù)刻蝕對(duì)金電極的損耗，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果較高的重現(xiàn)性，是目前該方法制備納米多孔金需要解決的一個(gè)關(guān)鍵性問題。