[發明專利]兩步法制備納米多孔金及用于非小細胞肺癌耐藥相關微小RNA(let-7a)檢測

在審

• 申請號: 202010271409.2
• 申請日: 2020-04-09
• 公開（公告）號: CN111579610A
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發明（設計）人: 鄭艷潔;翁少煌;許奕純;陳莉;林麗清;劉愛林;林新華
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/48
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

1.一種基于兩步方波伏安法制備納米多孔金膜修飾金電極并用于非小細胞肺癌耐藥相關微小RNA(let-7a)檢測的方法，其特征在于通過兩步方波伏安法制備三維納米多孔金（NPG）薄膜，構建電化學生物傳感器，利用雜交前后硫堇分子電流強度的變化實現對目標基因序列microRNA的檢測。

2.根據權利要求1所述的基于兩步方波伏安法制備納米多孔金膜修飾金電極并用于非小細胞肺癌耐藥相關微小RNA(let-7a)檢測的方法，其特征在于三維納米多孔金的制備采用兩步方波伏安法，且所述的目標基因序列為let-7a的完整序列，具有高度的時序性、保守性和特異性。

3.根據權利要求1或2所述的基于兩步方波伏安法制備納米多孔金膜修飾金電極并用于非小細胞肺癌耐藥相關微小RNA(let-7a)檢測的方法，依序包括如下步驟：（1）金電極預處理；（2）納米多孔金膜修飾金電極的制備；（3）捕獲探針(5'-SH -TTT TTA ACT ATA CAACCT ACT ACC TCA -3')的自組裝及與目標微小RNA雜交；（4）在電化學DNA雜交指示劑硫堇溶液中富集；（5）帶有探針的納米多孔金膜修飾金電極在PBS緩沖液中，通過雜交前后硫堇電流強度的變化可檢測目標微小RNA。

4.根據權利要求3 所述的基于兩步方波伏安法制備納米多孔金膜修飾金電極并用于非小細胞肺癌耐藥相關微小RNA(let-7a)檢測的方法，其特征在于制備的納米多孔金膜修飾金電極，具有大的比表面積、良好的DNA負載能力、高導電及電催化能力，增強了該傳感器的靈敏度。

5.根據權利要求3 所述的基于兩步方波伏安法制備納米多孔金膜修飾金電極并用于非小細胞肺癌耐藥相關微小RNA(let-7a)檢測的方法，單鏈DNA及DNA/RNA雜合體與硫堇分子結合的數量不同，根據雜交前后電流強度的差異檢測目標微小RNA。

6.根據權利要求3 所述的基于兩步方波伏安法制備納米多孔金膜修飾金電極并用于非小細胞肺癌耐藥相關微小RNA(let-7a)檢測的方法，其特征在于金電極依次在1.0 μm、0.3 μm 和0.05 μm Al₂O₃粉末和水的混懸液打磨拋光至鏡面，再先后用丙酮、無水乙醇、超純水超聲清洗；將超聲好的金電極置于0.5 mol/L H₂SO₄ 溶液中進行電化學處理循環掃描至穩定，以除去表面上的可能的雜質，隨后用超純水超聲清洗，氮氣吹干備用；采用方波伏安法，設置方波伏安法的參數，初始電位為-0.8 V，終止電位為 2.5 V，電位增量為0.004V，振幅為0.025 V，頻率為2 Hz，將潔凈的金電極置于0.5 M H₂SO₄中反應；隨后，其他參數不變，僅將方波伏安法的頻率改為2000 Hz，將上述金電極置于0.5 M H₂SO₄中反應一次，即制得納米多孔金膜修飾金電極。