[發明專利]一種檢測克羅恩病的環狀RNA標志物及應用

有效

• 申請號: 202010250400.3
• 申請日: 2020-04-01
• 公開（公告）號: CN111733226B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 尹娟;龐智;葉玉蘭;胡彤;張麗平;李平
• 申請（專利權）人: 蘇州市立醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州智品專利代理事務所(普通合伙) 32345
• 代理人: 呂明霞

本發明在芯片篩查到的CD患者155個上調的circRNA分子中，hsa_circRNA_009084在診斷敏感度和特異性評價時表現優異。本發明用于CD診斷的hsa_circRNA_009084未見國內外有相關文獻報道和專利申請。本發明技術中血液中hsa_circRNA_009084分子檢測僅需RT?PCR方法，簡單易操作，臨床應用推廣可行性大；hsa_circRNA_009084可應用于CD診斷和療效的快速判斷。本發明提供了一種檢測克羅恩病的環狀RNA標志物，環狀標志物為hsa_circRNA_009084。本發明提供了一種檢測克羅恩病的環狀RNA標志物的應用，環狀標志物為hsa_circRNA_009084作為克羅恩病檢測方法中的標志物。

技術領域

本發明屬于分子生物醫學領域，特別涉及克羅恩病。

背景技術

近年來,炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease，IBD)，包括克羅恩病(Crohn's disease，CD)和潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis， UC)在發展中國家的發病率日益上升。

環狀RNA(Circular RNAs，circRNAs)由信使RNA前體(pre-mRNAs)反向剪接而來，可能包含內含子序列、外顯子序列，或同時包含內含子和外顯子序列。circRNA多數是可行使調控功能的非編碼RNA(non-coding RNAs，ncRNAs)，可通過吸附microRNA 或結合到其它分子上，在轉錄水平或轉錄后水平調控基因表達。 circRNA因閉合環狀結構不受外切酶影響，半衰期長，可穩定存在于細胞，具有一定組織特異性、時序特異性及疾病特異性，是理想的潛在的疾病分子生物標記物。越來越多的研究表明circRNA分子在多種疾病，如結直腸癌(colorectal cancer，CRC)、乳腺癌(breast cancer)、類風關(rheumatoid arthritis，RA)和先兆子癇(pre-eclampsia)的發生發展中起作用，可作為疾病診療的分子生物學標記物。

CD可累及全消化道，表現為非連續性病變。UC主要累及直腸和結腸，呈連續性彌漫性分布。為鑒別診斷CD和UC，需綜合考慮臨床癥狀、內鏡檢查、影像技術及組織活檢結果等，目前沒有特異性強的血清生物學標志。目前對IBD診斷主要依賴于臨床癥狀、內鏡、病理、影像技術和生化特征等，且常用的生化指標如糞便鈣衛蛋白、血沉、白細胞、血清抗微生物抗體等特異性差、靈敏度不高。對CD 和UC的鑒別診斷依賴于內鏡檢查。若能減少傳統的侵入性檢查，將特異性circRNA用于評估疾病的嚴重程度和復發情況，將具有重要臨床意義。

circRNA是否可作為IBD臨床診療的分子生物學標志物？目前國內外相關研究報道非常少，東南大學附屬中大醫院陳洪教授等[1] 的研究表明:在環狀RNA芯片檢測的基礎上，通過實時定量PCR 檢測發現活動期CD患者病變組織中hsa circ 0023397明顯低于健康對照組,miR-106b明顯高于健康對照組，活動期CD患者腸黏膜組織中可能存在著由于hsacirc 0023397下調引起miR-106b過度表達,繼而導致ATG16L1表達下調并降低CD患者自噬功能。上海交大附屬仁濟醫院的冉志華教授等對環狀RNA組織芯片的研究也發現：CD患者組織樣本中163個上調的circRNA靶向435miRNAs，及55個下調的circRNA靶向207個miRNA。生信分析預測 hsa circRNA 102685可能參與凋亡、Toll樣受體及p53信號通路 [2]。

發明人前期已收集CD患者和健康對照人群的外周血，分離外周血單個核細胞，通過Arraystar的Human circRNA Arrays篩查到CD 患者外周血單個核細胞中155個上調和229個下調的circRNA分子，實時熒光定量PCR法大樣本量驗證了4個上調的circRNA分子在CD病患者臨床診斷中的應用價值，用miRDB_V5.0和TaregetScan7.1 分析預測circRNA最可能結合的5個microRNA分子的種子序列。前期結果發表在Medicine[3]。