[發明專利]一種表達抗菌肽基因的植物乳桿菌

有效

• 申請號: 202010230656.8
• 申請日: 2020-03-27
• 公開（公告）號: CN111333713B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 孫嘉;潘禮龍;張明;陳衛;張灝
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N1/21;C12N15/74;A23L33/135;A61K39/02;A61P31/04;A61P1/00;C12R1/25
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

1.一種編碼CRAMP蛋白的基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.攜帶權利要求1所述基因的載體。

3.一種植物乳桿菌，其特征在于，表達權利要求1所述編碼CRAMP蛋白的基因。

4.根據權利要求3所述植物乳桿菌，其特征在于，以植物乳桿菌FCQHC24L1為宿主，以pMG36e或pNZ8148為載體。

5.根據權利要求3或4所述的植物乳桿菌，其特征在于，以Usp45信號肽促進CRAMP蛋白的表達。

6.根據權利要求5所述的植物乳桿菌，其特征在于，所述Usp45通過linker與CRAMP基因連接，所述linker包含2個或更多個選自Gly和Ser的氨基酸殘基。

7.一種構建權利要求3~5任一所述植物乳桿菌的方法，其特征在于，將SEQ ID NO.1所示的編碼CRAMP蛋白的基因與載體連接，再轉化至植物乳桿菌細胞中；所述載體為pMG36e或pNZ8148。

8.含有權利要求3~6任一所述植物乳桿菌的食用或藥用組合物。

9.根據權利要求8所述的組合物，其特征在于，所述植物乳桿菌在組合物中的含量≥1×10⁵CFU/mL或 1×10⁵CFU/g。

10.根據權利要求8所述的藥用組合物，其特征在于，還含有藥學上可接受的載體。

11.一種疫苗，其特征在于，含有權利要求3~6任一所述的植物乳桿菌或所述植物乳桿菌的純培養物。

12.根據權利要求11所述的疫苗，其特征在于，以植物乳桿菌的全培養物作為口服疫苗，或口服疫苗的主要成分。

13.根據權利要求12所述的疫苗，其特征在于，所述口服疫苗按如下方法制備：將權利要求3~6任一所述的植物乳桿菌接種于MRS液體培養基靜置培養過夜，以一定比例轉接于含MRS液體培養基，繼續培養至細菌進入對數生長期，全培養物直接作為口服疫苗。

14.根據權利要求13所述的疫苗，其特征在于，所述靜置培養的溫度為28~30℃。

15.根據權利要求13所述的疫苗，其特征在于，所述轉接是將所述植物乳桿菌以體積比（1~10）:100的比例接種于MRS培養基。

16.根據權利要求13所述的疫苗，其特征在于，所述對數生長期的細菌培養液的OD值為0.4~0.6。

17.權利要求3~6任一所述的植物乳桿菌在制備可引入腸道的產品中的應用，其特征在于，所述產品具有如下至少一種功能：

（a）抑制腸道炎癥；

（b）重塑腸黏膜屏障；

（c）改善腸黏膜通透性；

（d）降低炎癥因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平。