[發明專利]一種高效分離人滑膜原代細胞的方法有效
| 申請號： | 202010214431.3 | 申請日： | 2020-03-24 |
| 公開（公告）號： | CN111411076B | 公開（公告）日： | 2022-09-23 |
| 發明（設計）人： | 王丹丹;曹盛楠;師浩鈞;劉凡杰;孫國棟;王平;王磊磊;李華忠;陳元振;侯廣建;王濤;孟巖;任鵬程 | 申請（專利權）人： | 山東省醫藥生物技術研究中心（山東省病毒研究所） |
| 主分類號： | C12N5/077 | 分類號： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491 | 代理人： | 趙紅霞 |
| 地址： | 265000 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 高效 分離 人滑膜原代 細胞 方法 | ||
1.一種高效分離人滑膜原代細胞的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)取人體新鮮滑膜組織置于無菌培養皿中，采用Hank′s平衡鹽混合液反復沖洗，并將清洗后的滑膜組織轉移至無菌培養瓶中，以無菌剪刀剪碎，移入EP管并加入Hank′s平衡鹽混合液混勻，離心并棄上清；
所述Hank′s平衡鹽包括如下成分：
(2)收集離心后的沉淀物，加入含有青鏈霉素混合液的DMEM培養液重懸，并加入含Ⅱ型膠原酶和糖苷酶的消化液，置于CO2培養箱中進行消化培養；
所述消化液中，所述糖苷酶的含量為0.1-1U/mL，所述Ⅱ型膠原酶的含量為0.1-1U/mL；
(3)培養結束后，取出培養物并加入胰蛋白酶，吹打成漿狀，隨后用無菌細胞過濾篩過濾，收集濾液并離心，棄上清；
控制所述胰蛋白酶的含量為0.2U/每mL培養物；
(4)收集離心后的沉淀物，用DMEM高糖培養液重懸沉淀物，置于細胞培養瓶于CO2細胞培養箱中，進行細胞培養，待細胞貼壁，即得所需人滑膜原代細胞。
2.根據權利要求1所述的高效分離人滑膜原代細胞的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述青鏈霉素在所述DMEM培養液中的質量濃度為0.5-1.5wt％。
3.根據權利要求2所述的高效分離人滑膜原代細胞的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述消化培養步驟為35-40℃、3-8％CO2培養箱消化培養6h。
4.根據權利要求1-3任一項所述的高效分離人滑膜原代細胞的方法，其特征在于，所述步驟(4)中，所述DMEM高糖培養液中還包括0.5-1.5wt％青鏈霉素和8-12wt％澳洲胎牛血清。
5.根據權利要求4所述的高效分離人滑膜原代細胞的方法，其特征在于，所述步驟(4)中，所述細胞培養步驟為置于35-40℃、3-8％CO2恒溫培養。
6.根據權利要求5所述的高效分離人滑膜原代細胞的方法，其特征在于，所述步驟(4)中，還包括在培養48h后進行更換培養液的步驟。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于山東省醫藥生物技術研究中心（山東省病毒研究所），未經山東省醫藥生物技術研究中心（山東省病毒研究所）許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202010214431.3/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
