[發明專利]一種富營養化水體的生物修復技術

有效

• 申請號: 202010212475.2
• 申請日: 2020-03-24
• 公開（公告）號: CN111484142B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 彭欣;張華偉;劉俊峰;薛峰
• 申請（專利權）人: 浙江省海洋水產養殖研究所
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C02F103/08
• 代理公司: 北京國翰知識產權代理事務所(普通合伙) 11696
• 代理人: 吳勝平

1.姜油酮在提高龍須菜碳酸酐酶活性中的用途，其特征在于：所述姜油酮用于配制龍須菜培養液A，所述培養液A的配制方法包括：用100倍體積的海水稀釋Pro培養液，加入12mg/L姜油酮，并設定HCO₃^-為35mg/L；

Pro培養液成分：N：NaNO₃ 3.5g；P：NaH₂PO₄ 0 .2723g；鐵溶液：Fe(NH₄)₂(SO₄)₂·6H₂O0.17525g，Na₂EDTA 0 .165g；金屬溶液：Na₂EDTA 0.25g，H₃BO₃ 0.285g，FeCl₃·6H₂O0.0125g，MnCl₂· 4H₂O 0.0365g，ZnSO₄·7H₂O 0.0055g，CoCl₂·6H₂O 0.001g；H₂O 640mL；

所述海水鹽度為32，pH為8.10，經孔徑0.45μm的濾膜過濾后，濕熱滅菌20min，靜置平衡24h；

所述龍須菜在所述海水中培養10d后，選擇健康藻體，去除表面雜藻，用大量過濾海水沖洗后，分別接種1.6g龍須菜于含有相應0.4L培養液A的1L錐形瓶中，在培養溫度為20℃、光強為4000Lux下培養，光明暗周期為L:D＝12h:12h。

2.一種富營養化海水的生物修復方法，其特征在于：采用龍須菜和固定化復合菌聯合對所述富營養化海水進行生物修復，具體包括以下步驟：

S1、采集富營養化海域水樣，水樣指標為：NO₂^--N 0 .328mg/L，NO₃^--N 1 .138mg/L，NH₄⁺-N 0.267mg/L，PO₄^3--P 0.388mg/L；

S2、微藻培養：微藻中肋骨條藻以滅菌海水為培養基，光照強度為4000Lux，光明暗周期為L:D＝12h:12h，溫度為20℃下培養6d；

S3、龍須菜預培養：龍須菜以滅菌海水為培養基，光照強度為4000Lux，光明暗周期為L:D＝12h:12h，溫度為20℃下培養10d后，選擇健康藻體，去除表面雜藻，用大量過濾海水沖洗；

S4、模擬赤潮藻華生物修復實驗：取生長狀況良好、處于指數增長期的中肋骨條藻種液與滅菌海水混合后，充分搖勻后，使得中肋骨條藻起始密度為1×10⁷cells/mL，得模擬中肋骨條藻藻華培養液，準確移取0.4L到已高溫滅菌的1L錐形瓶中，投加4.8mg姜油酮，再投入1.6g龍須菜，150g固定化復合菌，在培養溫度為20℃、光強為4000Lux下培養，光明暗周期為L:D＝12h:12h，培養2d后投加28g/L緩釋微球，每隔5天用采集的滅菌海水換水一次，換水量在35％，共培養9d。

3.根據權利要求2所述的生物修復方法，其特征在于：所述緩釋微球的制備方法包括以下步驟：

a、取甜葉菊苷，(2R ,3R)-二氫槲皮素溶于無菌海水，得甜葉菊苷和(2R ,3R)-二氫槲皮素混合溶液，取海藻酸鈉粉末溶于無菌海水，得海藻酸鈉粘稠溶液，將兩者混合均勻后，得材料膠體溶液；

b、取氯化鈣與殼聚糖粉末，溶于m/v為1-1.3％的乙酸溶液中制成固定液，固定液中氯化鈣的濃度m/v為1.8-2.2％，殼聚糖的濃度m/v為0.6-1.1％；

c、將a中材料膠體溶液逐滴滴入b中固定液中，滴加完畢后，靜置40-60min，得緩釋微球，除去固定液，去離子水洗滌緩釋微球，真空冷凍干燥，得成品；

所述緩釋微球中甜葉菊苷的質量分數為1-1.2％，(2R,3R)-二氫槲皮素的質量分數為0.6-0.8％，海藻酸鈉的質量分數為2-3％。