[發(fā)明專利]一種基于膠體金法快速檢測(cè)結(jié)核菌分泌蛋白的方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202010194087.6 | 申請(qǐng)日： | 2020-03-19 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN111443198A | 公開（公告）日： | 2020-07-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 何麗美;崔俊杰;楊皓恩 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 濟(jì)南杏恩生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | G01N33/569 | 分類號(hào)： | G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543 |
| 代理公司： | 濟(jì)南尚本知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37307 | 代理人： | 楊寶根 |
| 地址： | 250100 山東省濟(jì)南市華*** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 膠體 快速 檢測(cè) 結(jié)核菌 分泌 蛋白 方法 | ||
1.一種基于膠體金法快速檢測(cè)結(jié)核菌分泌蛋白的方法，其特征在于：本方法通過膠體金法判斷人體體液中是否含有活動(dòng)性結(jié)核分枝桿菌基因序列中RD1、RD2以及RD3片段所轉(zhuǎn)譯出的分泌蛋白，從而判斷是否患有結(jié)核病。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于膠體金法快速檢測(cè)結(jié)核菌分泌蛋白的方法，其特征在于：包括如下步驟 ：
步驟一：獲取人體體液樣品；
步驟二：對(duì)人體體液樣品進(jìn)行處理；
步驟三：取一條帶有聚合膠金墊的試紙條對(duì)處理后的人體體液樣品吸收并進(jìn)行抗原抗體結(jié)合反應(yīng)，檢測(cè)其是否含有活動(dòng)性結(jié)核分枝桿菌基因序列中RD1、RD2以及RD3片段所轉(zhuǎn)譯出的分泌蛋白；
步驟四：試紙條吸收與處理后的人體體液樣品結(jié)合完成后，室溫下靜置15分鐘，判斷結(jié)果。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于膠體金法快速檢測(cè)結(jié)核菌分泌蛋白的方法，其特征在于：所述的人體體液樣品為痰液或尿液。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于膠體金法快速檢測(cè)結(jié)核菌分泌蛋白的方法，其特征在于：所述的試紙條包括樣品墊、聚合膠金墊、硝酸纖維素膜、硝酸纖維素膜檢測(cè)線、對(duì)照線以及吸收墊，所述的試紙條試紙自上而下依次為樣品墊、聚合膠金墊、硝酸纖維素膜以及吸收墊，所述的硝酸纖維素膜檢測(cè)線和對(duì)照線設(shè)置在硝酸纖維素膜上，所述的硝酸纖維素膜檢測(cè)線位于對(duì)照線下方。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種基于膠體金法快速檢測(cè)結(jié)核菌分泌蛋白的方法，其特征在于：所述的聚合膠金墊內(nèi)有特異性活動(dòng)性結(jié)核分枝桿菌抗體捕捉樣品抗原和膠金抗體復(fù)合物結(jié)合形成抗體-抗原-抗體*的三明治夾心法，確保有效的捕捉到樣品抗原，所述的硝酸纖維素膜檢測(cè)線包被檢測(cè)抗體，對(duì)照線包被可與捕捉抗體結(jié)合的對(duì)照抗體，吸收墊是樣品毛細(xì)管現(xiàn)象終結(jié)的區(qū)域。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種基于膠體金法快速檢測(cè)結(jié)核菌分泌蛋白的方法，其特征在于：所述的特異性活動(dòng)性結(jié)核分枝桿菌抗體為氯金酸標(biāo)記活動(dòng)性結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞表面釋放的分泌蛋白抗體。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種基于膠體金法快速檢測(cè)結(jié)核菌分泌蛋白的方法，其特征在于：所述的步驟四中判斷結(jié)果的依據(jù)是：
陽(yáng)性顯示：兩條紅色反應(yīng)線，一條位于硝酸纖維素膜檢測(cè)線區(qū)，另一條位于對(duì)照線區(qū)，陽(yáng)性結(jié)果表示樣品中含有活動(dòng)性結(jié)核分枝桿菌基因序列中RD1、RD2以及RD3片段所轉(zhuǎn)譯出的分泌蛋白；
陰性顯示：一條紅色反應(yīng)線，位于對(duì)照線區(qū)，硝酸纖維素膜檢測(cè)線區(qū)內(nèi)無紅色反應(yīng)線，陰性結(jié)果表示樣品中不含有活動(dòng)性結(jié)核分枝桿菌基因序列中RD1、RD2以及RD3片段所轉(zhuǎn)譯出的分泌蛋白；
檢測(cè)無效：若試紙條都沒有出現(xiàn)紅色反應(yīng)線或僅在硝酸纖維素膜檢測(cè)線區(qū)內(nèi)無紅色反應(yīng)線，表明不正確操作過程或試紙條已變質(zhì)損壞，需要重試。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于膠體金法快速檢測(cè)結(jié)核菌分泌蛋白的方法，其特征在于：所述的試紙條的最低檢出濃度為4ng/ml。
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