[發明專利]一種新型地中海貧血基因RDB雜交方法

在審

• 申請號: 202010192309.0
• 申請日: 2020-03-18
• 公開（公告）號: CN111205963A
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發明（設計）人: 王秋華;鐘青燕;羅世強;王敬仁;鐘鑫;張玲;許澤輝
• 申請（專利權）人: 柳州市婦幼保健院
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12Q1/6816
• 代理公司: 北京八月瓜知識產權代理有限公司 11543
• 代理人: 李斌

本發明公開了一種新型地中海貧血基因RDB雜交方法，包括以下步驟：S1：使用者裁剪裝有膜條的反應試劑板條一側，裝有膜條的反應試劑板條透明空腔一端出現開口，并在對應膜條旁邊按照樣本號編號；S2：將反應試劑板條空腔開口水平向上，并通過醫用無菌注射液依次向各個膜條所在空腔注射A液，然后再依次通過空腔頂端開口用加樣槍加入PCR產物至裝有膜條內部的空腔中，此時使用者將試劑板條放入沸水浴中加熱10分鐘，加熱過程中沸水液面低于空腔頂端開口處。通過該操作方法能夠省去傳統操作過程中膜條反復夾取夾出檢測試劑管中的操作步驟，方便使用者按照順序對膜條編號，在實驗中不會打亂膜條順序，且減少膜條與外界接觸幾率。

技術領域

本發明涉及醫學檢測技術領域，更具體地說，涉及一種新型地中海貧血基因RDB雜交方法。

背景技術

地中海貧血(以下簡稱“地貧”)以一種因珠蛋白合成障礙所致的遺傳性溶血性疾病，全球約1.67％的人群攜帶地貧基因。地貧的臨床表現呈多樣性，輕者本人多無自覺癥狀而不易察覺，常因體檢時發現輕度貧血或家系分析時才診斷，未在婚前進行有關地貧檢查的夫婦，要求懷孕后早篩查，早診斷，確診后流產是目前防止重型地貧胎兒出生、保障母體安全的唯一辦法。對遺傳咨詢后確認為高風險地貧胎兒時，應盡早通過羊水穿刺或絨毛取樣后，進行基因檢測，可診斷地貧胎兒的基因型，地中海貧血基因檢測為通過抽血進行PCR的DNA檢測，地貧的診斷主要依據臨床表現、實驗室檢查和基因診斷，通過采集受檢者外周血進行DNA提取PCR擴增，擴增產物在膜條上進行雜交，經過A液、B液、POD和顯色液等過程，得出受檢者是否攜帶地貧基因，為疾病防控及治療提供檢測依據

目前，地貧基因檢測方式多采用實驗室檢查和基因診斷，在實驗室檢查和基因診斷中首先是將上百個膜條放置到對應的反應管中(一張膜條需一管反應管)變性，雜交；然后再從上百個反應管子中把膜條夾出放置實驗瓶中，再使用專用設備對其進一步經過A液、B液、POD和顯色液等雜交過程，之后實驗人員再將膜條逐一排列按1---N進行排列分析，然而這一整個過程中需要把上百張膜條放置到對應的反應管子中，然后又反復夾出，放進，需要大量的時間和精力來轉移膜條，并且實驗最后一步需實驗人員將無毫無順序膜條逐一排列，這一過程也是耗時，整個實驗過程設計不合理，使用不方便，影響試驗效率，故不能滿足使用需求。

為此，提出一種新型地中海貧血基因RDB雜交方法。

本發明內容

1.要解決的技術問題

針對現有技術中存在的問題，本發明的目的在于提供一種新型地中海貧血基因RDB雜交方法，通過該操作方法能夠省去傳統操作過程中膜條反復夾取夾出檢測試劑管中的操作步驟，實驗前期通過特制的試劑板條空腔包裹膜條結構，方便使用者按照順序對膜條編號，在實驗中不會打亂膜條順序，且減少膜條與外界接觸幾率，從而增加試驗檢測的精確度，實驗后期也無需將膜條按照順序再次排布，降低人為干擾造成檢測結果誤差，該方式方法優化傳統雜交檢測方法，有效的提高實驗人員的工作效率。

2.技術方案

為解決上述問題，本發明采用如下的技術方案。

一種新型地中海貧血基因RDB雜交方法，包括以下步驟：

S1：使用者裁剪裝有膜條的反應試劑板條一側，裝有膜條的反應試劑板條透明空腔一端出現開口，并在對應膜條旁邊按照樣本號編號；

S2：將反應試劑板條空腔開口水平向上，并通過醫用無菌注射液依次向各個膜條所在空腔注射A液，然后再依次通過空腔頂端開口用加樣槍加入PCR產物至裝有膜條內部的空腔中，此時使用者將試劑板條放入沸水浴中加熱10分鐘，加熱過程中沸水液面低于空腔頂端開口處，避免沸水倒灌造成交叉感染；

S3：加熱十分鐘后取出沸水浴中的試劑板條，并放入雜交箱42.7℃雜交1.5—5小時；