[發明專利]一種特異性識別蛋白PABPN1L的多克隆抗體的制備方法

在審

• 申請號: 202010186645.4
• 申請日: 2020-03-17
• 公開（公告）號: CN111808189A
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 王瑩;劉明兮;馮天昊;吳佳艷
• 申請（專利權）人: 南京市婦幼保健院
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/06;C07K14/47;C12N15/12;C12N15/70
• 代理公司: 南京禾易知識產權代理有限公司 32320
• 代理人: 師自春

本發明公開了一種特異性識別蛋白PABPN1L的多克隆抗體的制備方法，該方法包括如下步驟：S1：蛋白PABPN1L抗原表位分析；S2：將選定的目的片段的DNA通過PCR擴增后插入到表達載體構建含有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的重組表達載體，將所述重組表達載體轉化大腸桿菌感受態細胞獲得重組蛋白PABPN1L抗原；S3：將所述重組蛋白PABPN1L抗原免疫動物，經血清獲得特異性識別蛋白PABPN1L的多克隆抗體；在重組蛋白制備中采用大腸桿菌表達系統，能很好的保證重組蛋白的表達，表達產量高，有利于大批量的制備特異性識別蛋白PABPN1L的多克隆抗體。

技術領域

本發明涉及生物科學和檢測試劑技術領域，具體為一種特異性識別蛋白PABPN1L的多克隆抗體的制備方法。

背景技術

PABPs(poly(A)-binding protein)蛋白家族是一類高度保守的真核RNA結合蛋白。這類蛋白的特征在于特異性識別聚核苷酸序列poly A。Poly A存在于mRNA的3’端，這意味著PABPs可結合幾乎所有的mRNA，參與mRNA相關的生物學事件。PABPs可分為七種，分別為：PABPC1、PABPC3、PABPC4、PABPC4L、ePABP、PABPN1和PABPC5。其中PABPC1、PABPC3、PABPC4、PABPC4L為細胞質蛋白，PABPN1為核蛋白，ePABP為胚胎蛋白，PABPC5為X染色體編碼蛋白。PABPs家族蛋白功能重要：決定mRNA的尾部長度，協助mRNA運輸到胞質，參與mRNA蛋白翻譯等。

核蛋白PABPN1蛋白特殊之處在于，它只含有一個RRM(RNA recognition motif，RNA識別模體)。PABPN1L(PABPN1 like,類聚腺苷酸核蛋白1)在人體廣泛表達于多個組織臟器，在腎上腺、睪丸、子宮內膜等多組織器官均有高表達(PMID 24309898)，在小鼠則體現為卵巢優勢表達(PMID 25409824)。PABPN1L的功能、特殊性值得更進一步的研究，因此，本發明提供的高效的、高特異性的PABPN1L抗體制備方法為相關研究提供重要基礎。

發明內容

本發明的目的在于提供一種特異性識別蛋白PABPN1L的多克隆抗體的制備方法，以解決背景技術中提出的問題。

為實現目的，本發明提供如下技術方案，一種特異性識別蛋白PABPN1L的多克隆抗體的制備方法，該方法包括如下步驟：

S1：蛋白PABPN1L抗原表位分析，通過抗原表位分析選擇目的片段用作蛋白PABPN1L的重組表達，所述目的片段的基因序列如序列表中SEQ ID N0.1所示；

S2：將選定的目的片段的DNA通過PCR擴增后插入到表達載體構建含有如SEQ IDNO.1所示核昔酸序列的重組表達載體，將所述重組表達載體轉化大腸桿菌感受態細胞獲得重組蛋白PABPN1L抗原；

S3：將所述重組蛋白PABPN1L抗原免疫動物，經血清獲得特異性識別蛋白PABPN1L的多克隆抗體。

優選的，步驟S2中PCR擴增的引物序列為SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。

優選的，步驟S2中的表達載體為pET-28a(+)。

優選的，大腸桿菌感受態為大腸桿菌BL21(DE3)感受態細胞。

優選的，步驟S3中重組蛋白PABPN1L抗原免疫的動物為新西蘭大白兔、ICR小鼠。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：