[發(fā)明專利]基于長(zhǎng)余輝材料的標(biāo)記溶液、免疫層析試紙及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010186358.3
• 申請(qǐng)日: 2020-03-17
• 公開（公告）號(hào): CN111426827A
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬星;安眾福;史慧芳;周玉東;黃維
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 哈爾濱工業(yè)大學(xué)（深圳）（哈爾濱工業(yè)大學(xué)深圳科技創(chuàng)新研究院）
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N21/64
• 代理公司: 深圳市添源知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44451
• 代理人: 羅志偉

本發(fā)明提供了一種基于長(zhǎng)余輝材料的標(biāo)記物、免疫層析試紙及其應(yīng)用，所述基于長(zhǎng)余輝物的標(biāo)記溶液采用以下步驟制備得到：配置長(zhǎng)余輝材料/水溶性高分子表面活性劑/羧甲基纖維素（CMC）的溶液作為標(biāo)記物，并檢測(cè)CRP抗原和SAA抗原，本發(fā)明的免疫層析試包含長(zhǎng)余輝有機(jī)磷光納米顆粒，其毒性低，靈敏度高，且發(fā)光信號(hào)穩(wěn)定性好，外界背景干擾小，即使載體或樣品中熒光特性基質(zhì)多，也能幾乎排除其影響。對(duì)CRP抗原和SAA抗原的檢測(cè)限分別為0.8ng/mL和0.5ng/mL，具有很高的靈敏度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫層析技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于長(zhǎng)余輝材料的標(biāo)記溶液、免疫層析試紙及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

20世紀(jì)90年代以來(lái)，免疫層析技術(shù)因其快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、單人份檢測(cè)等特點(diǎn)得到迅速發(fā)展，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢測(cè)、食品質(zhì)量監(jiān)測(cè)、毒品檢測(cè)和環(huán)境監(jiān)測(cè)。目前,免疫層析技術(shù)朝著高靈敏度、定量和多元檢測(cè)的方向發(fā)展，并且有可能成為病原體、惡性腫瘤以及心血管疾病等的早期有效和靈敏的篩查診斷技術(shù)。

目前最為常見的是膠體金試紙，其一般可以在15分鐘內(nèi)讀取檢測(cè)結(jié)果，但該試紙的靈敏度相對(duì)較低，并且制作工藝復(fù)雜，穩(wěn)定性和重復(fù)性差。各種熒光納米材料由于其光電磁性能及獨(dú)特的結(jié)構(gòu)使得其成為非常有前景的膠體金替代示蹤劑。熒光試紙依據(jù)熒光強(qiáng)度的變化可對(duì)待檢樣品中微量或痕量物質(zhì)進(jìn)行定量檢測(cè)，更符合目前體外診斷領(lǐng)域?qū)ι锎蠓肿訖z測(cè)準(zhǔn)確定量、多標(biāo)記、高通量的要求。熒光微球免疫層析試紙檢測(cè)技術(shù)采用的熒光微球一般是通過(guò)物理或化學(xué)等方法在微球表面標(biāo)記熒光物質(zhì)或在微球內(nèi)部螯合稀土元素等微小顆粒來(lái)實(shí)現(xiàn)，其顆粒直徑一般在納米級(jí)至微米級(jí)別范圍內(nèi)。熒光微球可通過(guò)標(biāo)記不同顏色的熒光物質(zhì)并結(jié)合特定的單抗來(lái)實(shí)現(xiàn)多標(biāo)記、檢測(cè)不同待測(cè)物的目的。量子點(diǎn)免疫層析試紙檢測(cè)技術(shù)采用的量子點(diǎn)與傳統(tǒng)的有機(jī)染料相比，具有明顯優(yōu)勢(shì)，比如量子點(diǎn)的斯托克斯位移比較大，激發(fā)波長(zhǎng)較寬而發(fā)射波長(zhǎng)較窄，且量子點(diǎn)發(fā)射的熒光很穩(wěn)定，不僅量子產(chǎn)率高，還可抗熒光漂白等。上轉(zhuǎn)換發(fā)光免疫層析試紙檢測(cè)技術(shù)采用的上轉(zhuǎn)化發(fā)光粒子與熒光染料和量子點(diǎn)納米顆粒相比，上轉(zhuǎn)換納米顆粒毒性低，靈敏度高且發(fā)光信號(hào)穩(wěn)定性好，外界背景干擾小，不受載體或樣品中具有熒光特性基質(zhì)的影響。還有最近幾年新起的時(shí)間分辨熒光免疫層析試紙檢測(cè)技術(shù)以及納米酶免疫層析試紙檢測(cè)技術(shù)。

熒光微球免疫層析試紙檢測(cè)技術(shù)和熒光微球免疫層析試紙檢測(cè)技術(shù)雖然檢測(cè)靈敏度比同條件下的膠體金試紙檢測(cè)技術(shù)提高了不少，但是外界背景干擾大，受載體或樣品中具有熒光特性基質(zhì)的影響大，限制了其運(yùn)用。量子點(diǎn)免疫層析試紙檢測(cè)技術(shù)受技術(shù)水平的制約，包括材料制備和設(shè)備精度等因素限制，使得其檢測(cè)成本較高而難以市場(chǎng)化推廣。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明公開了一種基于長(zhǎng)余輝材料的標(biāo)記溶液、免疫層析試紙及其應(yīng)用。

對(duì)此，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種基于長(zhǎng)余輝材料的標(biāo)記溶液，其包含長(zhǎng)余輝有機(jī)磷光分子。

所述基于長(zhǎng)余輝材料的標(biāo)記溶液的制備方法，包括以下步驟：

步驟S1，配置長(zhǎng)余輝材料/水溶性表面活性劑/羧甲基纖維素(CMC)的溶液，所述長(zhǎng)余輝材料包含長(zhǎng)余輝有機(jī)磷光分子；其中，所述長(zhǎng)余輝有機(jī)磷光分子是指在紫外燈的激發(fā)下，移除紫外燈等激發(fā)光源之后，仍能繼續(xù)發(fā)光的一系列有機(jī)化合物。

步驟S2，在長(zhǎng)余輝材料/水溶性表面活性劑/CMC的溶液中加入MES(2-(N-嗎啉代)乙磺酸)，并進(jìn)行離心，倒去上清液，再加入MES，進(jìn)行超聲粉碎，得到粉碎后的長(zhǎng)余輝材料/水溶性表面活性劑/CMC/MES溶液；

步驟S3，在EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽)、NHS(N-羥基琥珀酰亞胺，N-Hydroxysuccinimide)的混合液中加入MES混合后，加入到步驟S2得到的長(zhǎng)余輝材料/水溶性表面活性劑/CMC/MES溶液中，進(jìn)行混勻，然后離心，倒去上清液，加入磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline，PBS)，進(jìn)行超聲；