[發明專利]一種他克莫司粗晶的制備方法

在審

• 申請號: 202010183709.5
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN111253416A
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發明（設計）人: 沈萬照;黃曄;唐靜
• 申請（專利權）人: 江蘇九陽生物制藥有限公司
• 主分類號: C07D498/18
• 分類號: C07D498/18
• 代理公司: 深圳紫晴專利代理事務所(普通合伙) 44646
• 代理人: 程玉紅

本發明提供一種他克莫司粗晶的制備方法，將他克莫司發酵液酸化，樹脂吸附；過濾除去上清液，接著用水沖洗去除菌絲體后得到富含他克莫司的樹脂；然后用丙酮攪拌浸泡，得到他克莫司浸泡液，減壓濃縮成濃縮物；加入有機溶劑攪拌，除去固體，再將所得溶液靜置除去水層以獲得有機溶液；加入飽和碳酸氫鈉溶液進行洗滌，并除去水層，得到有機相，用純化水洗滌到中性，然后分層以獲得有機溶液層，最后將有機溶液減壓濃縮，得到黑褐色油狀物；加入極性溶劑攪拌溶解，再加入非極性溶劑，結晶后過濾得到他克莫司晶體；減壓干燥，得到他克莫司粗品。本發明方法具有生產成本低廉、工藝簡單、操作方便，適合于工業化生產等優點。

【技術領域】

本發明屬于生物制藥工程領域，涉及一種微生物藥物的制備方法，特別涉及一種他克莫司粗晶的制備方法。

【背景技術】

他克莫司(Tacrolimus，FK-506)是從S.tsukubaensis的發酵液中提取得到的大環內酯類強效免疫抑制劑，其免疫活性是環孢菌素A的10～100倍，在預防各種器官移植出現排斥反應的效果優于環孢菌素。他克莫司能減少肝腎移植受體的急、慢性排斥反應，患者使用后的細菌和病毒感染率也較環孢素治療者低，尤其是他克莫司有較強的親肝性，對肝移植的功效比環孢素強，而且FK-506和MMF(霉酚酸酯)及Pred(強的松)三聯用藥具有明顯的協同作用，效果更好。他克莫司不僅可用于防止器官移植免疫反應的發生，還可用于治療已發生的免疫反應及自身免疫性疾病如系統性紅斑狼瘡，具有廣闊的應用前景。

目前，他克莫司一般采用微生物發酵生產，發酵液中除了他克莫司外，還有未利用完全的培養基、酸性化合物(如脂肪酸)、堿性物質(如生物堿，多肽，中性脂肪等脂溶性化合物)以及無機鹽等，他克莫司在上述產物中的含量低，一般從發酵液中提取得到的黑褐色濃縮物為粘稠狀，其中所含他克莫司的量低于40％，高效液相色譜(HPLC)測定純度低于60％，而主雜子囊霉素及二氫他克莫司的含量高于15％。他克莫司在液體狀態易降解，在粘稠狀濃縮物中亦不利于保存和運輸，因而通常都是將發酵所得的黑褐色濃縮物馬上純化成純度較高的他克莫司晶體以方便儲存和運輸。然而黑褐色濃縮物要純化成純度較高的他克莫司晶體須經過柱層析等以系列繁雜的工序才能得到他克莫司晶體。

有鑒于此，一種生產成本低廉、工藝簡單、操作方便適合于工業化生產的他克莫司粗晶制備的改進方法是工業化生產他克莫司原料藥所迫切需要的。本發明提供了一種他克莫司粗晶的制備方法,且目前市場上未見他克莫司粗晶形式的產品。

【發明內容】

本發明要解決的技術問題，在于提供一種生產成本低廉、工藝簡單、操作方便適合于工業化生產的他克莫司粗晶的制備方法。

本發明是這樣實現的：

一種他克莫司粗晶的制備方法，將筑波鏈霉菌發酵產生的他克莫司發酵液采用如下步驟進行操作：

(1)富集洗滌：將他克莫司發酵液酸化，樹脂吸附；過濾除去上清液，接著用水沖洗菌絲體和樹脂，去除菌絲體后得到富含他克莫司的樹脂；

(2)浸泡濃縮：將步驟(1)處理所得的富含他克莫司的樹脂用丙酮攪拌浸泡，得到他克莫司浸泡液，減壓濃縮成濃縮物；

(3)萃取：加入有機溶劑至步驟(2)處理所得的濃縮物中,并攪拌，然后過濾或離心除去固體，再將所得溶液靜置以使溶液分為水、有機溶液兩層，并除去水層以獲得有機溶液；

(4)洗滌濃縮：加入飽和碳酸氫鈉溶液至經過步驟(3)處理所得有機溶液中，所述飽和碳酸氫鈉溶液與有機溶液體積比為0.1～1:1，對有機溶液進行洗滌，并除去水層，得到有機相，繼續用純化水洗滌到水層中性為止，然后分層以獲得有機溶液層，最后將有機溶液減壓濃縮，得到黑褐色油狀物；