[發明專利]一種細菌染色法的制片方法及其應用

在審

• 申請號: 202010180395.3
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN111351689A
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 鄒文政;林松泉;李忠琴
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 廈門市新華專利商標代理有限公司 35203
• 代理人: 朱凌

本發明提供一種細菌染色法的制片方法及其應用，所述制片方法包括涂片，步驟如下：取干凈載玻片，在相近兩處分別滴加一滴無菌生理鹽水，以無菌操作用接種環挑取少量植株細菌于其中一滴生理鹽水中；然后用接種環劃線引流至另一滴生理鹽水，使菌體從第一滴生理鹽水自由進入第二滴生理鹽水，使菌體稀釋，進而自由分散均勻；最后在兩滴生理鹽水中間劃線水流斷開，避免造成兩滴生理鹽水的水液來回流動。本發明方法使菌體分散的更加均勻，能夠防止涂片固定過厚出現菌體重疊現象，同時干燥固定時間短，便于操作，降低了假陽性和假陰性現象，可大大提高染色觀察的準確度。

技術領域

本發明涉及微生物染色領域，具體涉及一種細菌染色法的制片方法及其應用。

背景技術

細菌屬于原核生物，因其菌體小要想清楚的觀察其大小和形態，需經染色和顯微鏡放大后才能看到。常用的細菌染色法有單染法、復染法和鑒別染色法。而鑒別染色法主要有革蘭氏染色、美藍染色、抗酸染色、瑞氏染色和姬姆薩染色等方法。在對細菌進行涂片、染色、制片中，主要分為傳統人工操作與利用儀器設備自動操作。由于傳統人工操作涂片、染色、制片，其所需設備儀器少，投資小。故應用較為廣泛與普遍，如學校教學。

以革蘭氏染色法為例，它是微生物學技術中，尤其是細菌檢測、分類與鑒定的一種眾所周知的、普遍的染色法。革蘭氏染色法常規的方法步驟主要有：制片、結晶紫初染、碘液媒染、乙醇脫色與番紅復染。該染色法由于細菌細胞壁成分和結構的差異，可以將陽性細菌染成紫色，而陰性細菌染成紅色。而在革蘭氏染色操作中經常會出現假陽性和假陰性的結果，其原因主要是假陽性可能是由于涂片過厚或者是結晶紫染色過度，導致脫色不完全。假陰性可能是因為細胞固定過度，造成細胞壁通透性的改變，而出現假陰性結果；另外，細胞培養時間太長，可能已經有部分細胞發生死亡或者自溶，也導致細胞壁通透性的改變而出現假陰性結果。在操作方面造成假陽性或假陰性結果的往往是初學者或者不熟練操作者。因此，對革蘭氏染色法進行改進，使操作簡單化并能提高結果正確性顯得十分重要。

在常規革蘭氏染色法中，對于初學者，制片步驟若菌體涂抹分散不均勻，會導致涂片固定過厚，則容易造成假陽性與影響菌體形態觀察；干燥步驟中采用自然風干則浪費等待時間，加長了整個染色操作時間；若采用酒精燈微熱干燥與固定，對初學者容易出現玻片斷裂或加熱固定過度造成假陰性，且鞭毛染色與伴孢晶體染色不能使用加熱固定。而本發明可以很好的解決上述問題。

發明內容

本發明要解決的技術問題，在于提供一種細菌染色法的制片方法及其應用，該方法使菌體分散的更加均勻，能夠防止涂片固定過厚出現菌體重疊現象，同時干燥固定時間短，便于操作，降低了假陽性和假陰性現象，可大大提高染色觀察的準確度。

本發明是這樣實現的：

一種細菌染色法的制片方法，所述制片方法包括涂片，步驟如下：取干凈載玻片，在相近兩處分別滴加一滴無菌生理鹽水，以無菌操作用接種環挑取少量植株細菌于其中一滴生理鹽水中；然后用接種環劃線引流至另一滴生理鹽水，使菌體從第一滴生理鹽水自由進入第二滴生理鹽水，使菌體稀釋，進而自由分散均勻；最后在兩滴生理鹽水中間劃線水流斷開，避免造成兩滴生理鹽水的水液來回流動。

進一步地，所述制片方法還包括干燥固定，步驟如下：涂片完成后，采用電吹風把載玻片上的菌懸液水吹干，以達到干燥、固定效果。

進一步地，所述吹干具體操作為：將載玻片持平，菌懸液面朝上，用電吹風從載玻片下方、垂直從下往上吹熱風，直至水滴干掉為止，避免風直吹菌懸液。

進一步地，所述制片方法可以運用于細菌簡單染色、革蘭氏染色、細菌芽孢染色與鞭毛染色。

本發明具有如下優點：

1.本發明采用劃線引流操作方式，使待染色菌體稀釋，提高其分散性和均勻性，菌體均為單個存在，避免出現菌體重疊現象影響染色觀察與結果。