[發明專利]一種與三疣梭子蟹遺傳性別相關的分子標記

在審

• 申請號: 202010177023.5
• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN111269975A
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發明（設計）人: 陸俊鍇;王春琳;李榮華;張周毅;張偉佳;母昌考;宋微微
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12Q1/6879
• 分類號: C12Q1/6879;C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

本發明提供一種鑒定三疣梭子蟹遺傳性別的方法，其中使用了用于鑒別三疣梭子蟹性別的SNP位點，所述的SNP位點位于序列為SEQ ID NO:1片段；或由SEQ ID NO:1取代、缺失、添加一個或幾個核苷酸，由SEQ ID NO:1衍生片段的第878位，其堿基為TC。本發明所提供的SNP位點分子標記在雄性個體中呈現二等位基因雜合型，而在雌性個體中均呈現等位基因純合型，可以采用PCR擴增測序方法或KASP方法進行檢測。檢測方法靈活，結果穩定，其中KASP檢測方法通量較高，檢測速度快，應用簡單，為三疣梭子蟹全雌苗種的繁育提供重要工具。

技術領域

本發明屬于水產生物遺傳育種技術領域，具體涉及一種與三疣梭子蟹遺傳性別相關的分子標記。

背景技術

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)廣泛分布于中國、朝鮮、日本等海域，是一種重要的大型海產經濟蟹類，且雌性紅膏蟹因為卵黃物質的積累，風味成分和營養物質含量更為豐富，市場價格遠高于雄蟹。因此，開展三疣梭子蟹全雌單性養殖，具有良好的市場前景。采用性別反轉技術篩選性反轉的個體，然后與正常親本交配繁殖是進行單性群體構建的方法之一，該方法要求能同時鑒別親本的遺傳性別和表型性別，性別連鎖分子標記的開發有利于快速鑒定性反轉個體，提高目標親本選擇效率。

分子標記技術是一個用來鑒定遺傳性別的有效工具。單核苷酸多態性(singlenucleotide polymorphism，SNP)作為第三代分子標記在基因分型中得到了廣泛的應用。競爭性等位基因特異性PCR(kompetitive allele-specific PCR,KASP)，是基于等位基因特異性寡核苷酸延伸和熒光共振能量轉移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)信號的單個SNP基因分型方法之一，已成為一項全球性的基準技術，具有高通量、低成本、高靈敏度和特異性等特點。

發明內容

本發明提供一種與三疣梭子蟹遺傳性別相關的分子標記，通過檢測該三疣分子標記可快速進行高通量的性別鑒定，從而彌補現有技術的不足。

本發明首先提供一種三疣梭子蟹性別鑒定標記的SNP位點，是分布在序列為SEQID NO:1的片段上的第878位的性別連鎖SNP位點，其堿基為TC；

本發明還提供用于三疣梭子蟹性別鑒定的分子試劑，所述的試劑用于檢測上述的SNP位點；

所述的分子試劑，其一種是用于PCR擴增測序方法的試劑；另一種是用于KASP檢測方法的試劑；

其中用于PCR擴增測序方法的試劑，包含有用于檢測上述SNP位點的PCR擴增測序的引物對，其序列信息如下：

PS8 Forward：5'-ATACCAGACAAGAGGGCTTC-3'(SEQ ID NO:2)、

PS8 Reverse 5'-TCCCATATAGATATTAGTGTCATTC-3'(SEQ ID NO:3)；

其中用于KASP檢測方法的試劑，其中包含有如下的引物：

PtS2FAM(SEQ ID NO:4)：

GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAGGCTAGTGCACTGATCCTCCA

PtS2HEX(SEQ ID NO:5)：

GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGGCTAGTGCACTGATCCTCCG

PtS2C(SEQ ID NO:6)：

CTGTCAACTTCACCTCAAGTTGATGTTA；

本發明再一個方面提供檢測三疣梭子蟹的雌雄性別的方法，是通過檢測上述的SNP位點來辨別三疣梭子蟹的雌雄性別；